Главная страница
Навигация по странице:

  • Биохимическая активность.

  • Микробиологическая диагностика.

  • Специфическая профилактика.

  • Неспецифическая профилактика

  • 3.2. Коклюшная палочка – возбудитель коклюша Коклюш

  • Таксономия Род – Bordetella Виды Bord. Pertussis; Bord. Parapertussis; Bord. Bronchiseptica.Морфология

  • Биохимическая активность

  • Микробиологическая диагностика

  • Специфическая профилактика

  • Методичка № 8 ЧМ Дифтерия. Коклюш. 3 Дифтерийная палочка возбудители дифтерии. Дифтерия


    Скачать 131.5 Kb.
    Название3 Дифтерийная палочка возбудители дифтерии. Дифтерия
    АнкорМетодичка № 8 ЧМ Дифтерия. Коклюш.doc
    Дата06.04.2017
    Размер131.5 Kb.
    Формат файлаdoc
    Имя файлаМетодичка № 8 ЧМ Дифтерия. Коклюш.doc
    ТипДокументы
    #649
    КатегорияБиология. Ветеринария. Сельское хозяйство



    3.1. Дифтерийная палочка – возбудители дифтерии.

    Дифтерияострое инфекционное заболевание, характеризующееся токсическим поражением сердечно-сосудистой и нервной систем, а также специфическим фибринозным (дифтеритическим) воспалением в месте входных ворот.

    Возбудитель был открыт в 1883 г. Клебсом, в 1884 г. Ф. Леффлер выделил его в чистой культуре. В 1888 г. Ру и Йерсен получили дифтерийный токсин, а в 1895 г. Беринг и Ру независимо друг от друга получили противодифтерийную сыворотку. В 1923 г. Рамон разработали технологию получения дифтерийного анатоксина, а позднее получил противодифтерийную сыворотку. Н.Г. Габричевский применил противодифтерийную сыворотку с лечебной целью и организовал ее производство в России.

    Таксономия.

    Род – Corynebacterium

    Вид – С. diphtheriae

    В род Corynebacterium входят около 60 видов. Согласно Международной классификации Берджи этот род разделен на 3 секции:

    1) патогенные для человека и животных;

    2) патогенные для растений;

    3) непатогенные.

    Морфология.

    Прямые или слегка изогнутые палочки размером 0,3 - 0,6 х 4 - 8 мкм, спор не образуют, имеют микрокапсулу, неподвижны.

    Особенностями дифтерийной палочки является наличие булавовидных утолщениях на концах; палочки отличаются также полиморфизмом; характерно взаимного расположения бактерий в мазках – в виде цифр V,X, L (не полное расхождение при делении);

    В толстых мазках располагаются в виде «пучка булавок». Булавовидные утолщения на концах связаны с наличием зерен волютина (тельца Бабеша-Эрнста) – производные нуклеиновых кислот, метахроматиновые гранулы полиметафосфата. Бактерии могут образовывать фильтрующиеся и L-формы.

    Грамположительные микроорганизмы. При окраске по методу Нейссера тело клетки окрашивается в синий цвет, а зерна волютина - в желтый. Метод Леффлера окрашивает цитоплазму в голубой цвет, а зерна волютина – в темно-синий.

    Культуральные свойства.

    Возбудители дифтерии - факультативные анаэробы, отимальная температура их культивирования 37оС, рН 7,3-8,0. Требовательны к питательной среде, для роста необходимо наличие цистина, гистидина, фенилаланина, метионина и т.д. Факторами роста являются Са2+, Mg2+, Fe2+, Zn2+, Mn2+, Cu2+. Для культивирования применяют сывороточные (среда Леффлера), среды с добавлением крови, хинозальную среду Бучина. Дифференциально-диагностические среды: теллуритовая среда (Конради, Трох, 1913г.), глицериновокровяная среда с теллуритом (среда Клауберг ΙΙ), сывороточно-теллуритовый агар с цистином (Тиндаль), теллурит-шоколадный агар Маклеода.

    На среде Леффлера бактерии растут в виде серовато-кремовых колоний, по типу «шагреневой кожи».

    На теллуритовых средах возбудитель образует серовато-черные колонии, что обусловлено восстановлением теллурита до металлического теллура, имеющего черный цвет и аккумулирующегося бактериями.
    Биохимическая активность.

    Дифтерийные палочки малоактивны, сбраживают с образованием кислоты глюкозу, мальтозу, галактозу, декстрин, не разлагают сахарозу, лактозу, маннит, восстанавливают нитраты в нитриты. Не гидролизуют мочевину (проба Закса отрицательная), не образуют индол. Разлагают цистеин (проба Пизу положительная).

    По культуральным, биохимическим, патогенетическим и некоторым другим свойствам дифтерийные палочки разделяются на 3 биовара.
    1) биовар митис, характеризуется свойствами:

      • ферментирует глюкозу, крахмал, мальтозу, не сбраживает сахарозу, гликоген, декстрин;

      • обладает цистиназной активностью;

      • восстанавливает нитраты;

      • уреазная проба отрицательная;

      • на средах с теллуритом образует мелкие гладкие блестящие черные колонии с ровным краем;

      • на жидкой среде дает равномерное помутнение и порошкообразный осадок;

      • дает зоны гемолиза на кровяных средах;

      • малотоксичен;

      • возбудители вызывают легкую спорадическую заболеваемость.


    2) биовар гравис, характеризуется свойствами:

      • ферментирует глюкозу, крахмал,декстрин, мальтозу,

      • обладает цистиназной активностью;

      • восстанавливает нитраты;

      • уреазная проба отрицательная;

      • на средах с теллуритом формирует крупные, сухие, матовые, плоские, серо-черные колонии, приподнятые в центре, с радиальной исчерченностью и неровным краем (напоминают маргаритку);

      • на жидкой среде образуется пленка, помутнение, крошковидный или крупнозернистый осадок;

      • дает гемолиз на кровяных средах;

    • обладает выраженными токсигенными свойствами;

    • выделяется от больных с тяжелой формой дифтерии, вызывает групповые вспышки.


    3) биовар интермедиус, характеризуется свойствами:

    • на средах с теллуритом образует мелкие сухие матовые серо-черные колонии с прозрачной периферией и неровным краем;

    • на жидкой среде дает помутнение с последующим просветлением и образованием мелкозернистого осадка;

    • гемолиз на кровяных средах отсутствует.

    Антигенная структура.

    Дифтерийная палочка имеет 2 антигена

      1. О – антиген (групповой), полисахарид клеточной стенки, термостабильный, дает перекрестные реакции с микобактериями и нокардиями;

      2. К – антиген (типовой), капсульный, термолабильный, иммуногенный, видоспецифичный.

    На практике серотипирование не применяется, однако выпускаются диагностические сыворотки для РА, РПГА.

    Для идентификации используют фаготипирование (22 фага) и бактериоцинотипирование (25 бактериоцинов).

    Факторы патогенности.

    Токсины. Палочка выделяет токсин – дифтерийный экзотоксин. По силе он занимает 3-е место после ботулинического и столбнячного. Термолабильный, высокотоксичный, иммуногенный, протективный, обладает анестезирующим действием. Гистотоксин обладает дермонекротическими, гемолитическими свойствами. Синтезируется в виде неактивного предшественника - единой полипептидной цепи с молекулярной массой 61 кД. Активируется под действием собственной протеазы, которая разрезает полипептид на 2 связанные между собой дисульфидными связями пептида: А (21 кД) и В (39 кД). Пептид В выполняет акцепторную функцию – распознает рецептор, связывается с ним, формирует внутримембранный канал, через который проникает в клетку пептид А. Пептид А – это фермент, который обеспечивает перенос аденозиндифосфатрибозы из НАД на один из аминокислотных остатков (гистидина) белкового фактора элонгации EF-2. В результате модификации EF-2 утрачивает свою активность, что приводит к подавлению синтеза белка рибосомами на стадии транслокации. Токсин синтезируют только С. diphtheriae, лизогенные умеренным конвертирующим tox-профагом, интегрирующимся с помощью сайт-специфической рекомбинации. Оперон, кодирующий синтез токсина имеет промотор tox Р и 3 участка: tox S, tox А, tox В. Тox S – обеспечивает выход токсина через мембрану в периплазматическое пространство бактериальной клетки. Утрата клеткой профага или мутации в tox-опероне делают клетку малотоксичной.

    Ферменты патогенности: гиалуронидаза, нейраминидаза, фибринолизин, каталаза – факторы инвазии, лейкоцидин – обеспечивает устойчивость к фагоцитозу;

    Структурные и химические компоненты клетки – пили (способствуют адгезии на чувствительных клетках), микрокапсула (обеспечивает устойчивость к фагоцитозу), корд-фактор (6-6-дифосфоэфир трегалозы, коринемиколовая и коринемиколиновая кислоты, обладающие нарушает фосфорилирование в митохондриях), бактериоцины (корицины) кодирование синтеза которых передается плазмидами.

    Резистентность.

    При нагревании до 60оС палочки погибают за 10 мин, при 100оС наступает мгновенная гибель. 5% раствор карболовой кислоты обеспечивает инактивацию через – 1 мин. Под действием прямого солнечного света палочка выживает несколько часов, в высохших пленках и кале – 3-4 мес., на предметах обихода и одежде сохраняется до 15 дней, на мягких игрушках – 3 мес., в воде и молоке – до 20 дней, в пыли – до 5 мес. Дифтерийные палочки чувствительны к пенициллину, тетрациклину, эритромицину.

    Эпидемиология.

    Источник инфекции – больной человек, носитель или реконвалесцент.

    Механизмы передачи инфекции:

    • аэрогенный (пути - воздушно-капельный и воздушно-пылевой);

    • контактный (путь - непрямой контактный).

    Больной опасен (в смысле заражения) с последних дней инкубационного периода.

    Входные ворота – слизистые оболочки носа, зева, гортани, трахеи, бронхов, конъюнктивы глаз, наружных половых органов; раневая поверхность, пупочная рана.

    Инкубационный период – 2-14-20 дней.

    Патогенез.

    Возбудители адсорбируются на чувствительных клетках, колонизируют эпителий. Секретируют гистотоксин, который инициирует развитие местного фибринозного воспаления, некроз эпителия, паретическое расширение сосудов с нарушением их проницаемости, отек тканей и выход фибриногена из сосудов. Фибриноген под влиянием тканевого тромбопластина, некротизированных тканей и атмосферным кислородом свертывается. На поверхности образуется фибринозная пленка. На многослойном плоском эпителии - плотная, спаянная с прилежащими тканями; на однослойном – тонкая, легко снимается. Разрастание пленок в воздухоносных путях может привести к асфиксии (истинный круп). Процесс сопровождают регионарные лимфадениты. Системное действие токсина приводит к гемодинамическим нарушениям. Развивается токсический миокардит и ранний паралич сердца. Возможно поражение канальцевого аппарата почек, некроз коркового слоя. В нервной системе – цитолиз нервных клеток с развитием поздних параличей мягкого неба, диафрагмы, сердца, блуждающего нерва. Смерть при дифтерии может наступить от раннего или позднего паралича сердца и диафрагмы, а также в результате истинного крупа (закупорки дыхательных путей оторвавшимися пленками).

    У детей грудного возраста чаще развивается дифтерия зева (насмокр, слабая выраженность общих проявлений). Необходимо осматривать пупочную ранку для исключения местного процесса.
    Иммунитет.

    После перенесенного заболевания развивается стойкий напряженный антитоксический и мало выраженный антимикробный иммунитет. Возможно развитие носительства (10%) и повторное заражение (6-8%). Уровень иммунитета можно установить в РПГА. Диагностические – титры - 1:200 и выше. С той же целью применяется реакция Шика – внутрикожное введение микродоз дифтерийного токсина (1/40 Dlm 0,2 мл) внутрикожно. Через 48 ч появляется покраснение и инфильтрат, что свидетельствует об отсутствии антитоксических антител; при их наличии реакция не возникает. Из-за опасности сенсибилизации организма эту пробу проводят редко.
    Микробиологическая диагностика.

    Исследуемый материал – слизь из зева, носа, пленки с миндалин, раневое отделяемое, кровь

    1. Бактериоскопический метод – микроскопия мазков из исследуемого материала (окраска по Граму, Нейссеру, Леффлеру).

    2. Бактериологический метод – выделение чистой культуры возбудителя и ее идентификация. Необходимо не только выделить из исследуемого материала дифтерийную палочку, но и определить ее токсигенность.

    Определение токсигенности С. dphtheriae:

    1. биологическая проба на животных – внутрикожное заражение морских свинок фильтратом культуры дифтерийных бактерий – вызывает некроз в месте введения. Минимальная смертельная доза (20-30 нг) убивает морскую свинку на 4-5 день;

    2. заражение куриных эмбрионов (наблюдается гибель под действием токсина);

    3. внесение в культуру клеток ( выявление ЦПД);

    4. метод твердофазного ИФА с меченными пероксидазой антителами;

    5. использование ДНК-зонда для обнаружения tox-оперона в геноме;

    6. тест Илека и Оухтерлони (1948 г.) – основу составляет способность токсина и антитоксина диффундировать в агар и образовывать преципитаты (усы, стрелы) по ходу диффузии – метод двойной преципитации в геле, предварительный ответ может быть выдан через 48 часов, через 72 часа – заключение о наличии токсигенных коринебактерий, через 96 часов – окончательный ответ.

    3. Серодиагностика – РПГА, ИФА, РИА, реакция ко-агглютинации, реакция Шика.

    4. Экспресс – диагностика – РИФ, ИФА, РПГА, реакция ко-агглютинации.

    5. Биохимический и молекулярно-биологический метод – ПЦР (обнаружение tox-гена).
    Специфическая профилактика.

    Проводится плановая вакцинация в соответствии с национальным календарем прививок. Вакцинами АКДС, АКДС-М, анатоксинами: АДС, АДС-М, АД-М, АД.

    Вакцинация проводится в возрасте: 3 месяца; 4,5 месяцев; 6 месяцев; первая ревакцинация проводится через 18 месяцев после окончания вакцинации; вторая ревакцинация – в 7 лет; третья – в 14. Последующие ревакцинации - каждые 10 лет до 56 лет.

    Существует еще ряд вакцин для профилактики дифтерии: «Тетракок», «Д. Т. Вакс», «Имовакс Д.Т. Адюльт», «Бубо-М», «Тританрикс НВ».
    Неспецифическая профилактика – изоляция больного, выявление носителя (носителей токсигенных штаммов госпитализируют, нетоксигенных – санируют амбулаторно).

    Лечение

    Введение противодифтерийной антитоксической сыворотки, содержащей не менее 2000 МЕ в 1 мл. Внутримышечное введение в дозе 10000-400000 МЕ в зависимости от тяжести течения заболевания. При применении лошадиной сыворотки обязательно предварительное проведение кожной пробы и последующее введение противодифтерийной сыворотки по Безредке.

    Неспецифическая терапия – антибиотики и сульфаниламиды.

    3.2. Коклюшная палочка – возбудитель коклюша

    Коклюш – это острое инфекционное заболевание, характеризующееся острым катаральным воспалением верхних дыхательных путей и приступами спазматического кашля.
    История открытия

    Возбудитель коклюша впервые выделили от больного ребенка Ж. Борде и О. Жангу в 1900 г., в 1906 г. была получена чистая культура. Коклюш с французского переводится как пение петуха. 1911 г. Н. Ферри открыла В. bronchiseptica. В 1937 Г.Эльдеринг и П. Кендрик – выделили и изучили В. parapertussis независимо от У. Брэнфорда и Б. Славина.

    Таксономия

    Род – Bordetella

    Виды Bord. Pertussis; Bord. Parapertussis; Bord. Bronchiseptica.
    Морфология

    Палочки овоидной формы, мелкие, неподвижные, Bord. bronchiseptica – перитрих, спор не образуют, имеют нежную капсулу. Выявляется при окраске по методу Романовского – Гимзы. Грамотрицательные.
    Культуральные свойства

    Bord. Pertussis – строгие аэробы; требовательны к питательным средам, не растут на МПА, так как рост ингибируется жирными кислотами, для их нейтрализации в среде добавляют кровь, древесный уголь или ионообменные смолы. Bord. bronchiseptica и Bord. parapertussis растут на МПА. Bord. pertussis – гемоглобильнофильный микроорганизм, поэтому хорошо растет на картофельно - глицериновом агаре с кровью (среда Борде-Жангу), полусинтетическом – казеиново-угольном агаре без крови (КУА). Быстрый рост (через 2 суток) отмечается у Bord. parapertussis и Bord. bronchiseptica, а колонии Bord. pertussis появляются через 72 часа – мелкие, круглые с ровными краями, блестящие напоминают «капельки ртути» или «зерна жемчуга», вязкой консистенции. Рассматривают их с помощью бинокулярного стереоскопического микроскопа. Выявляются колонии с характерным световым конусом. Через 3-4 суток культивирования на кровяном агаре появляется слабая зона гемолиза. В жидких средах образуют равномерное помутнение с последующим выпадением осадка. Оптимальные условия роста: температура 35 -36оС , рН 6,8-7,4.

    При культивировании коклюшной палочки различают 4 фазы состояния с определенными морфологическими и биологическими свойствами:

    1 фаза (S-форма) – колонии круглые, выпуклые, влажные, Гр -, вырастают овоидные палочки;

    2 и 3 фазы – переходные к R-формам, колонии плоские, слизистые с желтоватым оттенком, определяется полиморфизм микроорганизма – овоидные и кокки;

    4 фаза – колонии уплотнены с желтым или зеленым пигментом, крупные, до 3 мм.
    Биохимическая активность

    Хемоорганотрофы. Малоактивны, особенно коклюшные палочки: не ферментируют сахара, не образуют индол, не восстанавливает нитраты (за исключением Bord. bronchiseptica), не содержат тирозиназу и уреазу.

    Паракоклюшная палочка разлагает тирозин, при этом среда окрашивается в коричневый цвет, и мочевину (проба Закса положительная).

    Антигенная структура

    О-антиген – видоспецифический. Выявлено 14 антигенных компонента. Родовой – 7 фактор. Видовые: 1 - Bord. pertussis; 14 - Bord. parapertussis; 12 - Bord. bronchiseptica.

    Типоспецифические антигены Bord. pertussis – 2,3,4,5, 6, 13 (наиболее часто встречаются серовары 1,2; 1,3; 1,2,3); у Bord. parapertussis – 8,9,10. Bord. bronchiseptica – 8, 9, 10, 11, 13.
    Факторы патогенности

    Токсины. Возбудители синтезируют несколько токсинов.

    1. Экзотоксин – термолабильный белок (инактивируется при 56оС), дермонекротоксин, протективный антиген, обладает тропизмом к нервной, сердечно-сосудистой системе. При введении мышам вызывает некроз, геморрагии и дегенерацию клеток почек, селезенки и печени. Токсин воздействует на систему цАМФ. Представлен двумя субъединицами – А (активный центр) и В (связывающий центр). Взаимодействие с клеточной стенкой происходит при помощи субъединицы В, опосредующей контакт субъединицы А с цитоплазмой. Токсин отщепляет никотинамид от никотинамидаденозина, что приводит к повышению концентрации цАМФ и ингибированию активности клеточных факторов резистентности.

    2. Цитотоксин вызывает местные поражения, приводящие к гибели и десквамации мерцательного эпителия. Токсин небелковой природы и является продуктом синтеза и трансформации муреина.

    3. Гистаминсенсибилизирующий фактор (эндотоксин) – белок, вызывает сенсибилизацию к гистамину.

    4. Лимфоцитозстимулирующий фактор – вызывает гипогликемию и снижение иммунологической реактивности.

    Ферменты патогенности: лецитиназа, плазмокоагулаза, гиалуронидаза, лецитиназа. Клеточные структуры – капсула, ворсинки.
    Резистентность

    Возбудитель малоустойчив во внешней среде, чувствителен к высушиванию, погибает при действии солнечного света в течение - 1 часа, при температуре 56оС – через 10-30 мин, в 3% растворе фенола и лизола – через несколько минут. При высыхании мокроты гибнет в течении нескольких часов. Чувствителен к антибиотикам – тетрациклину, стрептомицину, левомицетину.

    Эпидемиология.

    Источник инфекции – больные люди, реже бактерионосители. Источником Bord. bronchiseptica могут быть больные животные (возбудитель вызывает эпизоотии у свиней, собак, кошек, кроликов). Больные наиболее опасны в начальный период заболевания (заразный период при коклюше до 4-х недель, при паракоклюше - 2 недели).

    Механизм заражения - аэрогенный, пути - воздушно-капельный и контактно-бытовой. Следует отметить высокий индекс контагиозности – 97-100%, чаще болеют дети до 5 лет.
    Патогенез

    Возбудитель обладает тропизмом к цилиндрическому эпителию респираторного тракта. Инкубационный период 3 – 14 дней. Микроорганизм внедряется на слизистые, размножается, бронхогенным путем распространяется в бронхиолы и альвеолы. Возникает катаральное воспаление. Возбудитель выделяет токсины, под их действием эпителий некротизируется, кашлевые рецепторы перераздражаются, организм сенсибилизируется. Раздражаются рецепторы кашлевой рефлексогенной зоны «невроз респираторного тракта», в ЦНС (кашлевой центр продолговатого мозга) формируется доминантный очаг возбуждения, что вызывает приступообразный кашель. Судорожные приступы кащля могут провоцироваться неспецифическими раздражителями (звук, пыль). Бактериемии, как правило, не бывает.
    Различают клинические периоды:

    1) катаральный (2 недели); характеризуется сухим кашлем, состояние постепенно ухудшается;

    2) конвульсивный (судорожный) (4-6 недель) отмечаются приступы спастического кашля (до 20-30 раз в сутки). Во время приступа ребенок не может вдохнуть воздух; наблюдается серия из 5-10-15 кашлевых толчков (выдохов), после чего следует свистящий вдох (реприз, или «пение петуха»);

    3) период угасания – 2-4 недели – приступы наблюдаются все реже, происходит отторжение некротизированных участков слизистой оболочки верхних дыхательных путей в виде слепков.

    Смерть может наступить в результате асфиксии, пневмонии, в редкий случаях - от спонтанного пневмоторакса.

    У детей раннего возраста репризы не выражены, а у привитых детей может быть атипичное течение заболевания. У грудных детей возможно развитие коклюшной пневмонии. Типичны разрывы и язвочки на уздечке языка.

    В последние годы участились случаи заболевания у взрослых, протекающие без приступов кашля, в виде бронхитов с упорным кашлем, без повышения температуры.
    Иммунитет

    После перенесенного заболевания формируется стойкий напряженный типоспецифический антимикробный клеточный и гуморальный иммунитет. Секреторный иммуноглобулин А препятствует прилипанию бактерий к клеткам, а сывороточные иммуноглобулины G обеспечивают стойкий длительный иммунитет. У новорожденных имеются материнские иммуноглобулины G и иммуноглобулины А. Перекрестного иммунитета между Bord. pertussis, Bord. parapertussis и Bord. bronchiseptica не наблюдается.
    Микробиологическая диагностика

    Исследуемый материал – мокрота, слизистое отделяемое носоглотки, задней стенки глотки, кровь.

    1. Бактериоскопический метод – РИФ, люминесцентная микроскопия, окраска по Граму.

    2. Бактериологический методвыделение и идентификация возбудителя.

    3. Серодиагностика – РСК, РА, РПГА.

    4. Экспресс-диагностика – РИФ.

    5. Биохимическое и молекулярно-биологическое исследование – ПЦР.


    Неспецифическая профилактика

    Изоляция больных (госпитализация детей до 1 года). Контактным детям вводится нормальный человеческий иммуноглобулин с последующим наблюдением (карантин 14 дней).
    Специфическая профилактика

    Плановая вакцинация в соответствии с национальным календарем прививок проводится вакцинами АКДС, АКДС-М. Сроки вакцинации: 3 месяца; в 4,5 месяцев; в 6 месяцев; ревакцинация осуществляется в 1,5 года.

    Иммуноглобулин человеческий нормальный вводится в дозе 3 мл для экстренной профилактики детям, не болевшим коклюшем, после контакта с больными. Применяется 2-х кратно с интервалом 24 ч.

    Существует еще ряд вакцин применяющихся для профилактики – «Тетракок», «Бубо-Кок», «Тританрикс НВ», «Пентавак», «Гексавак», «Триацелювакс», «АКДС».
    Лечение

    Специфическое – противококлюшный иммуноглобулин человеческий, плазма иммунизированных доноров.

    Назначаются антибиотики (эритромицин, стрептомицин, ампициллин, левомицетин, тетрациклин). Применяется симптоматическая терапия (антигистаминные препараты), противосудорожные препараты и средства, стимулирующие работу сердца, кислородотерапия, психотерапия.

    написать администратору сайта