Главная страница
Экономика
Финансы
Биология
Медицина
Ветеринария
Сельское хозяйство
Математика
Начальные классы
Информатика
Вычислительная техника
История
Юриспруденция
Право
Философия
Логика
Этика
Религия
Политология
Социология
Физика
Языкознание
Языки
Промышленность
Энергетика
Культура
Искусство
Автоматика
Связь
Электротехника
Химия
Воспитательная работа
Другое
Дошкольное образование
Экология
Строительство
Русский язык и литература
Классному руководителю
Геология
Физкультура
Иностранные языки
Доп
образование
География
Логопедия
Школьному психологу
Технология
ИЗО, МХК
Казахский язык и лит
Обществознание
ОБЖ
Механика
Музыка
Директору, завучу
Социальному педагогу
Психология

8. Биохимические исследования


Скачать 78.2 Kb.
Название8. Биохимические исследования
Анкор8_Biokhimia[1] (1).docx
Дата06.07.2017
Размер78.2 Kb.
Формат файлаdocx
Имя файла8_Biokhimia[1] (1).docx
ТипДокументы
#12259

8. Биохимические исследования

  1. Гипертриглицеридемия как фактор риска сердечно-сосудистых заболеваний.

  2. Классификация дислипопротеинемий; первичные и втроичные дислипопротеинемии.

  3. Классификация нарушений липидного обмена.

  4. Методы клиинческой биохимии в диагностике патологии печени 9содержание субстратов, определение индивидуальных белков, активность ферментов, изоферментов и изоформ, состояние паренхимы печени).

  5. Лабораторные методы оценки липидного обмена.

  6. Лабораторные маркеры гепатитов различной этиологии: методика определения, клиническая интерпретация результатов.

  7. Алгоритм лабораторного обследования при подозрении на АФС.

  8. Липидный спектр крови: холестерин, ЛПНП, ЛПВП, ЛПОНП, триглицериды, оценка атерогенного фактора.

  9. Требования преаналитического этапа исследования белков. Факторы, обеспечивающие правильность и достоверность лабораторного исследования белкового обмена.

  10. Транспорт и депонирование железа в организме. Соотношение между трансферрином и ОЖСС, определение ферритина и трансферрина.

  11. Диагностические системы для определения сывороточного железа.

  12. Лабораторная диагностика аномалий обмена отдельных аминокислот (фенилкетонурия, цистиноз и цистинурия, алкаптонурия, гомоцистинурия, карциноидоз, болезнь Гартнупа).

  13. Лабораторные критерии латентного дефицита железа.

  14. Лабораторная характеристика антигенов при АФС.

  15. Клинико-диагностическое значение исследования белков острой фазы воспаления; С-реактивный белок в современной лабораторной практике.

  16. Методы определения холестерина в сыворотке крови.

  17. Требования преаналитического этапа исследования липидного спектра; факторы, обеспечивающие правильность и достоверность лабораторного исследования липидного обмена.

  18. Лабораторная диагностика порфирий.

  19. Нозологические формы, при которых встречаются нарушения пигментного обмена.

  20. Нозологические формы, при которых встречаются нарушения азотистого обмена – общие и частные.

8.1. Гипертриглицеридемия как фактор риска сердечно-сосудистых заболеваний

  • ТГ — это эфиры ЖК и спирта глицерина, которые входят в состав различных ЛП, постоянном подвергаясь гидролизу в плазме крови.

  • ТГ входят в состав практически всех ЛП, преобладают в хиломикронах и ЛПОНП. После приема жирной пищи концентрация ТГ в крови быстро повышается, но в норме через 10-12 часов возвращается к исходному уровню.

  • В настоящее время для оценки нарушения обмена ТГ предложены тесты с пищевой нагрузкой жиром (сливочное масло, сметана). У больных СД, МС, ожирением концентрация ТГ длительное время (более 12 часов) не приходит к норме.

  • Этот феномен в мировой литературе обозначается термином постпрандиальная ДЛП. Больные с постпрандиальной ДЛП предрасположены к развитию атеросклероза.

  • Показатель имеет наибольшее значение.

8.2.(8.3) Классификация дислипопротеинемий; первичные и втроичные дислипопротеинемии

  • Термины ГЛП – «гиперлипопротеинемия» и «гиперлипидемия» используются наряду с термином «дислипопротеинемия» и означают любое повышение уровня липидов и ЛП в плазме.

  • Для характеристики первичных (наследственно обусловленных) ГЛП, пользуются классификацией ВОЗ.

Вторичные ГЛП
эндокринная патология


  • Гипотиреоз

  • Сахарный диабет

  • Синдром Кушинга

  • Дефицит гормона роста

  • Булимия

  • Неврогенная анорексия

  • Ожирение

  • Гипопитуитризм

Заболевания внутренних органов

  • Нефротический синдром

  • Хр. почечная недостаточность

  • Уремия

  • Хр. заболевания печени (в основном билиарный цирроз)

  • Жировая дистрофия (липодистрофия)

  • Обструкция желчевыводящих путей (холестаз)

Панкреатит 

А также

  • Ряд генетических заболеваний (гликогенозы, порфирия)

  • Диета богатая насыщенными жирными кислотами

  • Диета богатая углеводами

  • Беременность

  • Алкоголизм, чрезмерное употребление алкоголя

Применение лекарственных средств

  • Мочегонные (тиазиды)

  • Бета-блокаторы

  • Эстрогены

  • Прогестагены

  • Андрогены

  • Кортикостероиды

  • Ретиноиды

  • Ингибиторы протеаз (при ВИЧ-инфекции)

8.4. Методы клинической биохимии в диагностике патологии печени

  • Синдром цитолиза: АСТ - цитоплазма, АЛТ – митохондрии, повышается позже (кинетические методы – определение активности), ГлДГ (глутаматдегидрогеназа) – митохондрии, острые тяжелые повреждения печени и жпп, ЛДГ-5 – гепатоспецифичен.

  • Синдром гепатодепрессии (малой печеночной недостаточности – без поражения ЦНС): определение факторов свертывания и компонентов системы гемостаза – особенно протромбиновая активность и проконвертин (фактор 7), альбумина сыворотки.

  • Мезенхимально-воспалительный синдром: тимоловая (+), сулемовая (-) пробы, гамма-глобулины сыворотки; белки - гаптоглобин и орозомукоид, α2-макроглобулин, β2-микроглобулин (синтез в печени).

  • Синдром холестаза: ЩФ, 5-нуклеотидаза (эпителий желчных канальцев), ГГТ – гамма-глутаминтрансфераза, лейцинаминопептидаза, ГлДГ, билирубин общий и прямой, желчные кислоты, холестерин, ФЛ, β-липопротеиды.

8.5. Лабораторные методы оценки липидного обмена

  • Нарушения липидного обмена проявляются изменениями основных липидных параметров в крови. Наиболее частые из них: ГХС, ГТГ, высокая концентрация ХС ЛПНП, пониженное содержание ХС ЛПВП.

  • Для оценки липидного профиля определяют ОХС, ТГ, ХС ЛПВП, ХС ЛПНП; последний рассчитывается по формуле Фридвалда при концентрации ТГ, не превышающей 4,5 ммоль/л (400 мг/дл):

  • ХС ЛПНП = ОХС {ХС ЛПВП+ (ТГ/2,2)} в ммоль/л.

  • ХС ЛПНП = ОХС {ХС ЛПВП+(ТГ/5)} в мг/дл.

  • При более высокой концентрации ТГ ХС ЛПНП определяется методом препаративного ультрацентрифугирования.

  • В сомнительных и не совсем ясных случаях для уточнения фенотипа ГЛП используют электрофорез ЛП сыворотки.

  • Индекс (коэффициент) атерогенности

коэффициент атерогенности

не больше 3-3,5 (4,5 – верхняя граница, по некоторым источникам)

8.6. Лабораторные маркеры гепатитов различной этиологии: методика определения, клиническая интерпретация результатов

  • Гепатит новорожденных – возрастание α-фетопротеина.

  • Острый вирусный гепатит В - характерен медленный рост α1-антитрипсина, нормальный кислый гликопротеин, нормальный или понижен- ный гаптоглобин.

  • Другие острофазные белки нормальны или слегка повышены, наиболее часто встречается высокий уровень церулоплазмина, в отличие от холангита, при котором все острофазные белки повышены.

  • Уровень преальбумина снижен.

  • IgA нормальный, IgМ м.б. повышен.

  • Острый вирусный гепатит А – картина сходна с гепатитом В.

  • Уровень α1-антитрипсина повышен.

  • Кислый гликопротеин – повышен в первые 10 дней.

  • Преальбумин - при переходе хронического персистирующего вирусного гепатита в хронический агрессивный гепатит и далее в постнекротический гепатит уровень белка обычно снижается.

  • α-фетопротеин – временно повышается.

  • Иммуноглобулины - уровень IgМ возрастает при остром гепатите А, но не изменен при гепатите В, при гепатите С - в норме.

Хронический активный гепатит

  • Повышение уровня церулоплазмина и снижение апоА1-липопротеина коррелирует с обострением активного хронического гепатита.

  • Комплемент - СЗ и С4 снижаются из-за нарушения синтеза; уровень снижения СЗ и С4 коррелирует с нарастанием активности.

  • Иммуноглобулины – существенно повышаются IgG.

8.7. Алгоритм лабораторного обследования при подозрении на АФС

  • Антифосфолипидный синдром - симптомокомплекс, в основе которого лежит развитие аутоиммунной реакции и появление антител к широко распространенным фосфолипидным детерминантам, присутствующим на мембранах тромбоцитов, клеток эндотелия, нервной ткани.

  • Для подтверждения диагноза «Антифосфолипидный синдром» необходимо сдать анализ крови из вены на маркеры АФС- на волчаночный антикоагулянт (ВА), на антитела к кардиолипину (аКЛ), антитела, реагирующие со смесью кардиолипина, холестерина, фосфатидилхолина, определяемые с помощью реакции агглютинации (ложноположительная реакция Вассермана); бета2-гликопротеин-1-кофакторзависимые антифосфолипидные антитела (бета2-ГП1-кофакторзависимые АФЛ). Если анализ оказался положительным (то есть если обнаружили маркеры АФС), его следует пересдать повторно через 8-12 недель.  И если повторный анализ также оказался положительным, то назначается лечение.

  • Для выявления степени тяжести заболевания обязательно назначают общий анализ крови (при АФС отмечается снижение уровня тромбоцитов) и коагулограмму (гемостазиорамму) - анализ крови на гемостаз (свертывающеюся систему крови). При наличии АФС коагулограмма сдается при беременности минимум один раз в 2 недели. В послеродовом периоде этот анализ сдается на третьи и пятые сутки после родов.

8.8. Липидный спектр крови: холестерин, ЛПНП, ЛПВП, ЛПОНП, триглицериды, оценка атерогенного фактора

  • К липидам плазмы относят ХС, ТГ и фосфолипиды.

  • ТГ — это эфиры ЖК и спирта глицерина, которые входят в состав различных ЛП, постоянном подвергаясь гидролизу в плазме крови. ТГ входят в состав практически всех ЛП, преобладают в хиломикронах и ЛПОНП. Показатель имеет наибольшее значение для диагностики атеросклероза.

  • ЖК синтезируются в организме из продуктов распада углеводов и поступают с пищей. Часть ЖК постоянно образуется в результате липолиза ТГ в жировой ткани.

  • Фосфолипиды являются важным структурным компонентом клеточных мембран, однако их содержание в крови никак не связано с риском ИБС.

  • Липиды транспортируются в крови в составе сложных надмолекулярных комплексов — ЛП.

  • ЛП представляют собой водорастворимые липидно-белковые глобулярные структуры, в состав которых входят молекулы белков, свободного ХС, эфиров ХС и фосфолипидов.

Белки, входящие в состав ЛП частиц, называют аполипопротеинами или апобелками

  • Основными ЛП в зависимости от их плотности, размеров и состава входящих липидов и апобелков являются: ХМ, ЛПОНП, ЛППП, ЛПНП (β-холестерин), ЛПВП (α-холестерин).

  • ХМ — наиболее крупные и наиболее легкие ЛП частицы. ХМ синтезируются в эпителиальных клетках тонкой кишки из липидов экзогенного (пищевого) происхождения; через систему лимфатических сосудов ХМ поступают в грудной лимфатический проток и оттуда в кровь, где подвергаются липолизу под действием липопротеидлипазы плазмы. В состав ХМ входят ТГ, в меньшем количестве эфиры ХС, фосфолипиды и апобелки. Изолированная гиперхиломикронемия встречается редко.

  • ЛПОНП синтезируются в печени. Состоят из апобелков, эндогенных ТГ и в меньшей степени из эфиров ХС, поэтому их повышенное содержание в плазме крови проявляется при гипертриглицеридемии (ГТГ).

  • ЛПОНП подвергаются липолизу в плазме и превращаются в ЛППП.

  • ЛППП содержат в своем составе больше эфиров ХС, нежели ЛПОНП. Повышенная концентрация в крови ЛППП проявляется гиперхолестеринемией (ГХС) и ГТГ.

  • Повышенное содержание в плазме ЛПНП отчетливо связано с развитием коронарного, каротидного и периферического атеросклероза. Однако для того чтобы ЛПНП стали атерогенными, они должны подвергнуться модификации (процессу перекисного окисления ЛПНП).

  • В результате ЛПНП запускают иммунные реакции, приводящие к формированию атеросклеротической бляшки.

  • ЛПВП — антиатерогенные ЛП частицы, которые осуществляют обратный транспорт ХС из сосудистой стенки и макрофагов в печень, откуда он выводится из организма в составе желчных кислот.

Уровень ХС ЛПВП в плазме имеет обратную зависимость с развитием атеросклероза; чем ниже содержание ХС ЛПВП, тем выше вероятность развития атеросклероза

8.9. Требования преаналитического этапа исследования белков

  • Общие требования к взятию крови

  • При взятии пробы крови должны быть приняты во внимание такие факторы, как положение тела и суточные колебания аналитов.

  • Положение тела существенно влияет на ренин, повышение активности фермента наблюдается при перемещении из положения лежа в положение стоя.

  • Пик содержания кортизола наблюдается между 4 часами ночи и 6 часами утра. Такие гормоны, как соматотропный, лютеинизирующий и фолликулостимулирующий высвобождаются порциями, и поэтому несколько проб крови, взятых в близкие временные интервалы должны быть оценены по значению медианы.

  • Многие гормоны, например, инсулин, проинсулин и С-пептид могут быть стабилизированы только помещением контейнера с образцом на лед немедленно после взятия крови. Такие образцы должны быть быстро подвергнуты центрифугированию, предпочтительно в центрифуге с охлаждением при 4° С, и сыворотка должна храниться замороженной до исследования. Перед исследованием замороженные образцы конечно должны быть полностью разморожены.

  • Также очень важно предотвратить возникновение гемолиза, поскольку при этом снижаются значения и инсулина, и проинсулина.

  • Проведение обработки крови сразу после ее после свертывания и замораживание сыворотки при -70° С позволяет сохранить длительную стабильность таких аналитов, как гастрин, пепсиноген-1 и инсулин.

  • Большинство аналитов, исследуемых с помощью иммунохимических методов, может определяться в сыворотке и/или гепаринизированной плазме.

  • Взятие крови с использованием ЭДТА и последующее быстрое замораживание плазмы признано адекватным способом сохранения нестабильных гормонов белковой природы: зндорфина, вазоактивного интестинального пептида, вещества P и панкреатического пептида.

  • В связи с ингибирующим влиянием на металпопротеиназы ЭДТА плазма рекомендуется также для исследований АКТГ, паратиреоидного гормона и глюкагона.

  • В некоторых случаях использование только одного ЭДТА не достаточно для стабилизации аналита. Так, даже когда кровь собирается с ЭДТА, плазма быстро отделяется и хранится в идеальных условиях, происходит активация комплемента. Однако, добавление к ЭДТА синтетического ингибитора протеазы нафамостат мезилата значительно улучшает стабильность компонентов комплемента.

8.10. Транспорт и депонирование железа в организме. Соотношение между трансферрином и ОЖСС, определение ферритина и трансферрина

  • Основным местом всасывания железа является тонкий кишечник. Железо в пище содержится в основном в форме Fе+3, но лучше всасывается в двухвалентной форме Fе+2. Под воздействием соляной кислоты желудочного сока железо высвобождается из пищи и превращается из Fе+3 в Fе+2.

  • В энтероцитах содержатся трансферрин и ферритин, которые регулируют в них абсорбцию железа. Между трансферрином и ферритином существует динамическое равновесие по связыванию железа. Трансферрин связывает железо и переносит его к мембранному переносчику.

  • Железо в сосудистом русле соединяется с трансферрином - гликопротеидом, синтезируемым в печени. В физиологических условиях и при дефиците железа только трансферрин важен как железотранспортирующий белок; с гаптоглобином и гемопексином транспортируется исключительно гем.

  • Неспецифическое связывание железа с другими транспортными белками, в частности альбумином, наблюдается при перегрузке железом при высоком уровне насыщения трансферрина.

  • Биологическая функция трансферрина заключается в его способности легко образовывать диссоциирующие комплексы с железом, что обеспечивает создание нетоксического пула железа в кровотоке, который доступен и позволяет распределять и депонировать железо в организме.

  • Металлосвязывающий участок молекулы трансферрина не является строго специфичным для железа. Трансферрин может связывать также хром, медь, магний, цинк, кобальт, однако сродство этих металлов ниже, чем железа.

  • Основным источником сывороточного пула железа (трансферрин-связанного железа) является поступление его из ретикулоэндотелиальной системы (РЭС - печень, селезенка), где происходит распад старых эритроцитов и утилизация освобождающегося железа. Небольшое количество железа поступает в плазму при абсорбции его в тонком кишечнике.

  • В норме только треть трансферрина насыщена железом.

Депонирование

  • Основными формами депонированного железа являются ферритин и гемосидерин, которые связывают "избыточное" железо и откладываются, практически, во всех тканях организма, но особенно интенсивно в печени, селезенке, мышцах, костном мозге.

  • Ферритин - комплекс, состоящий из гидрата закиси Fе+3 и белка апоферритина. Железо высвобождается из ферритина в двухвалентной форме. Ферритин локализуется преимущественно внутриклеточно, где играет важную роль в кратковременном и длительном депонировании железа, регуляции клеточного метаболизма и детоксикации избытка железа. Предполагается, что основными источниками сывороточного ферритина являются моноциты крови, макрофаги печени (клетки Купфера) и селезенки.

  • Ферритин, циркулирующий в крови, практически не участвует в депонировании железа, однако концентрация ферритина в сыворотке в физиологических условиях прямо коррелирует с количеством депонированного железа в организме. При дефиците железа, которое не сопровождается другими заболеваниями, так же, как при первичной или вторичной перегрузке железом, показатели ферритина в сыворотке дают достаточно точное представление о количестве железа в организме. Поэтому в клинической диагностике ферритин должен использоваться в первую очередь как параметр, оценивающий депонированное железо.

  • Гемосидерин по структуре мало отличается от ферритина. Это ферритин в макрофаге в аморфном состоянии.

  • После того как макрофаг поглощает молекулы железа, например, после фагоцитоза старых эритроцитов, немедленно начинается синтез апоферритина, который накапливается в цитоплазме, связывает железо, образуя ферритин.

  • Макрофаг насыщается железом в течение 4 ч, после чего в условиях перегрузки железом в цитоплазме молекулы ферритина агрегируют в мембранно-связанные частицы, известные как сидеросомы. В сидеросомах молекулы ферритина кристаллизуются, формируется гемосидерин.

  • Гемосидерин "упакован" в лизосомах и включает комплекс, состоящий из ферритина, окисленных остатков ли-пидов и других компонентов. Гранулы гемосидерина представляют собой внутриклеточные отложения железа, которые выявляются при окраске цитологических и гистологических препаратов по Перлсу. В отличие от ферритина гемосидерин не растворим в воде, поэтому железо гемосидерина с трудом подлежит мобилизации и практически не используется организмом.

8.11. Диагностические системы для определения сывороточного железа

  • Доминирующий метод определения железа сыворотки крови - спектрометрия. Колориметрическое определение железа сыворотки крови предполагает проведение нескольких этапов: диссоциацию железа из комплекса с трансферрином, восстановление иона железа из Fe3+ в Fe2+, формирование комплекса железо-хелатированный хромоген.

  • Часть белков в кислой среде мешает определению окрашенного комплекса, что требует депротеинизации. Международным комитетом по стандартизации в гематологии предложено преципитировать белки трихлоруксусной кислотой. Однако вследствие широкого применения автоматизированных систем методы, включающие депротеинизацию, большого распространения не получили. В прямых методах стабилизация белков достигается добавлением детергентов.

  • Диссоциацию комплекса железо-трансферрин осуществляют снижением рН. Для диссоциации комплекса предпочтительно значение рН 5,0, при этом одновременное добавление восстановителя позволяет провести диссоциацию полностью. В качестве восстановителей наиболее распространено применение аскорбиновой кислоты.

8.12. Лабораторная диагностика аномалий обмена отдельных аминокислот

Фенилкетонурия

  • Наследственная болезнь, обусловленная нарушением обмена фенилаланина; проявляется отставанием в физическом развитии и прогрессирующим слабоумием, расстройствами движений и мышечного тонуса. 

  • Фенилаланин является незаменимой аминокислотой для построения белковой молекулы и, кроме того, служит предшественником гормонов щитовидной железы (в частности, тироксина), адреналина и меланина. Метаболический блок при отсутствии фенилаланин-4-гидроксилазы приводит к накоплению поступающего с пищей фенилаланина во всех жидких средах организма.

  • Последствиями энзиматического дефекта являются также активация вспомогательных путей распада фенилаланина и накопление в тканях токсических продуктов его обмена, вторичные нарушения обмена тирозина и триптофана: пониженное образование нейромедиаторов головного мозга, обусловливающее запуск патогенетического механизма задержки умственного развития и прогрессирующего слабоумия.

Диагностика

  •  Диагноз основывается на обнаружении в сыворотке крови новорожденного повышенной концентрации фенилаланина с помощью микробиологического теста Гатри и его аналогов.

  • Для выявления в моче фенилпировиноградной кислоты и других кетоновых кислот, появляющихся к концу 1-й недели жизни, используют пробу Феллинга с 5—10% раствором FeCI3 или применяют индикаторные бумажки «Фенистикс», «Биофан» и др. Проба считается положительной при появлении сине-зеленого окрашивания.

  • С помощью автоматического аминоанализатора осуществляют количественное определение концентрации фенилаланина в крови.

  • Нагрузочные пробы с L-фенилаланином используют для уточнения причин гиперфенилаланинемии и для определения гетерозиготного носительства.

Цистиноз

  • Наследственное заболевание, обусловленное первичным нарушением обмена цистина с отложением его кристаллов в органах и тканях, в том числе почках, приводящее к развитию тяжелойнефропатии с вторичным тубулоинтерстициальным синдромом и картиной Б-резистентного рахита.

Диагностика

  • Для верификации цистиноза считается достаточным выявление офтальмологом при осмотре кристаллов в роговице у пациента с синдромом Фанкони, так как подобные кристаллы не обнаруживаются при других причинах.

  • Гексагональные или прямоугольные кристаллы цистина можно обнаружить в роговице (при исследовании с помощью щелевой лампы), в лейкоцитах периферической крови или костного мозга или в биоптатах слизистой оболочки прямой кишки. Диагноз подтверждают путем количественного определения цистина в лейкоцитах периферической крови или в культуре фибробластов. 

  • Ранний диагноз может быть установлен и с помощью генетического исследования – при наличии анамнеза рекомендуется пренатальная диагностика болезни с помощью измерения уровня свободного цистина в культуре амниоцитов или клетках ворсин хориона, или с помощью генетического исследования.

Цистинурия

  • Аминоацидурия (аминокислотурия) - увеличение экскреции аминокислот с мочой или присутствие в моче продуктов аминокислот, которые в норме не содержатся в ней (например, кетоновые тела).

  • Цистинурия (cystinuria; цистин + греч. uron моча) — наследственное заболевание, обусловленное нарушением транспорта двухосновных аминокислот (цистина, лизина, аргинина, орнитина) в эпителиальных клетках почечных канальцев и желудочно-кишечного тракта; тип наследования аутосомно-рецессивный.

  • Уролитиаз.

Диагностика

  • Микроскопическое исследование мочевого осадка с целью обнаружения кристаллов цистина. Самым надежным скринирующим тестом на избыточное содержание цистина в моче является реакция с цианид-нитропруссидом: при концентрации цистина выше 75 мг/л смесь приобретает цвет красного вина. Проводить тест следует с порцией из суточной мочи.

  • Для уточнения диагноза и дифференциальный диагностики с ацетонурией, при которой также отмечают положительную реакцию с цианиднитропруссидом, необходимо проведение дополнительного исследования мочи методами тонкослойной хроматографии, высоковольтного электрофореза или с помощью хроматографии на ионообменных смолах для определения профиля экскретируемых аминокислот. 

Алкаптонурия

  • Наследственное заболевание, обусловленное выпадением функций оксидазы гомогентизиновой кислоты и характеризующееся расстройством обмена тирозина и экскрецией с мочой большого количества гомогентизиновой кислоты. 

  • В нормальных условиях гомогентизиновая кислота — промежуточный продукт распада тирозина и фенилаланина — переводится в малеилацетоуксусную кислоту, из которой в конечном счёте образуютсяфумаровая и ацетоуксусная кислоты, вступающие в другие биохимические циклы. 

Диагностика

  • Наиболее информативным для диагностики алкаптонурии является метод количественного определения гомогентизиновой кислоты и бензохиноуксусной кислоты в моче. Для этого используетсяферментативная спектрофотометрия или жидкостная хроматография.

  • Более простым, но менее точным способом выявления данного заболевания является оценка цвета мочи через 12-24 ч после пребывания ее на воздухе. В этом случае происходит окисление алкаптона, что приводит к изменению цвета мочи (становится бурой или черной). Данные изменения происходят только при щелочных значениях рН мочи, поэтому при кислой реакции мочи необходимо ее подщелачивание.

  • Важно разграничить генетическую алкаптонурию от алкаптонурии при гиповитаминозе С. Последняя исчезает после назначения адекватной дозы аскорбиновой кислоты.

Гомоцистинурия

  • Наследственная болезнь, обусловленная нарушением обмена метионина, характеризующаяся поражением соединительной ткани, нервной, костной, мышечной и сердечно-сосудистой систем.

  • В результате снижения активности специального фермента печени (цистатионинсинтетазы) в организме ребенка накапливаются метионин и гомоцистин, оказывающие повреждающее действие на ряд систем организма (костную и центральную нервную системы).

Диагностика

  • Пациенты с подозрением на гомоцистинурию должны направляться к медицинскому генетику для анализа генеалогических данных и проведения молекулярно-генетической диагностики. Диагноз устанавливается с помощью биохимического исследования крови и мочи: при гомоцистинурии в моче, плазме крови, ликворе обнаруживаются значительные количества гомоцистина, повышение содержания метионина при сниженном уровне цистина. В биоптатах кожи и печени выявляется специфический ферментативный дефект.

Болезнь Хартнупа

  • Хартнупа болезнь [по имени больного Хартнупа (Е. Hartnup)] — наследственная аномалия обмена триптофана, проявляющаяся поражением кожи и нервной системы.

Диагностика

  • В моче больных отмечается полное отсутствие триптофана, обнаруживаются значительные количества глутамина, аспарагина, гистидина, серина, треонина. Экскреция пролина, метионина, аргинина снижена.

  • Гипераминоацидурия объясняется повреждением почечных канальцев индольными продуктами, поступающими из кишечника.

  • Выведение индикана с мочой в несколько раз превышает норму.

  • В моче обнаруживают значительное количество индолилмолочной и индолилуксусной кислот.

Введение антибиотиков широкого спектра действия приводит к полному прекращению экскреции индольных продуктов с мочой, что может быть использовано как диагностический тест.

8.13. Лабораторные критерии латентного дефицита железа

  • Состояние сопровождается сидеропеническими симптомами, обусловленными дефицитом железа в тканях.

  • Лабораторные показатели характеризуются снижением концентрации сывороточного ферритина (5–15 мкг/л), сывороточного железа в плазме, увеличением трансферрина.

  • При истощении запасов железа развивается недостаток транспортного железа, хотя синтез Hb на этой стадии не нарушен и, следовательно, показатели красной крови (Hb, Ht, RBC, эритроцитарные индексы – MCV, MCH, MCHC) сохраняются в пределах нормы. Однако при дополнительных стрессах или потерях железа латентный дефицит железа может перейти в манифестный дефицит железа.

8.14. Лабораторная характеристика антигенов при АФС

  • Антифосфолипидный синдром - симптомокомплекс, в основе которого лежит развитие аутоиммунной реакции и появление антител к широко распространенным фосфолипидным детерминантам, присутствующим на мембранах тромбоцитов, клеток эндотелия, нервной ткани.

  • Антитела к следующим антигенам:

  • волчаночный антикоагулянт - популяция антифосфолипидных антител класса IgG или IgM, способных in vitro подавлять фосфолипиднозависимые коагуляционные реакции путем взаимодействия с фосфолипидным компонентом протромбиназы активаторного комплекса. Волчаночный антикоагулянт был обнаружен вначале в сыворотке крови больных системной красной волчанкой. При системной красной волчанке продукция волчаночного антикоагулянта ассоциируется, в отличие от результатов in vitro, не с кровоточивостью, а с парадоксальным увеличением частоты тромбозов;

  • антитела к кардиолипину - иммунологически гетерогенная популяция антител, реагирующих с иммобилизованным отрицательно заряженным фосфолипидом - кардиолипином, являющимся основным антигеном реакции Вассермана; антитела к кардиолипину могут относится к различным изотипам иммуноглобулинов IgG, IgM, IgA;

  • антитела, реагирующие со смесью кардиолипина, холестерина, фосфатидилхолина, определяемые с помощью реакции агглютинации (ложноположительная реакция Вассермана);

  • бета2-гликопротеин-1-кофакторзависимые антифосфолипидные антитела(бета2-ГП1-кофакторзависимые АФЛ) - подавляющие естественную антикоагулянтную активность бета2-ГП1. При антифосфолипидном синдроме взаимодействие АФЛ с фосфолипидами зависит от кофактора бета2-гликопротеина-1. Он имеет молекулярную массу 50.000.000 Да и активно связывается с фосфолипидами, ДНК, компонентами мембран тромбоцитов и митохондрий, гепарином. Бета2-ГП1 является важным естественным антикоагулянтом, он подавляет внутреннюю активацию антикоагуляционного каскада и агрегацию тромбоцитов. Подавление бета2-ГП1-кофакторзависимых антител сопровождается развитием тромбозов.

8.15. Клинико-диагностическое значение исследования белков острой фазы воспаления; С-реактивный белок в современной лабораторной практике

  • Главным органом, который реагирует на повреждение тканей и воспаление, является печень. Клетки печени синтезируют и направляют в кровоток белки, которые оказывают значительное влияние на течение воспалительного процесса.

  • При повреждении тканей и воспалении различной этиологии в плазме крови изменяется концентрация до 30 белков, так или иначе участвующих в воспалительных реакциях ответа организма на повреждение.

  • Появление их в крови или увеличение их содержания указывает на наличие воспалительного процесса. Поэтому их и называют «белками острой фазы воспаления».

  • Белки острой фазы:синтезируются гепатоцитами; являются ярко выраженными гликопротеинами.

  • являются ингибиторами клеточных протеаз, увеличивающихся в плазме крови при воспалении;

  • уменьшают аутоиммунизацию организма (вследствие чего способствуют онкогенезу);

  • являются иммунодепрессантами Т-киллеров;

  • обеспечивают вынашивание беременности, обуславливая снижение Т-клеточного иммунитета, который наиболее активен в отношении растущих клеток.

Методы определения

  • Традиционные методы: реакции преципитации, турбидиметрические (нефелометрические, фотометрические – изменение интенсивности света, рассеянного взвешенными чатсицами) методы, другие фотометрические методы, спектрофотометрические методы, кинетические методы (автоматизированные методы).

  • Иммунохимические — иммуноферментный анализ, иммунофлюоресцентный анализ, радиоиммунологический анализ, иммуноэлектрофорез, иммунопреципитация, электроиммунодиффузия; хроматографический анализ, в том числе, гельфильтрация; электрофорез и др.

  • «Главные» реактанты ОФ, увеличение концентрации в 100-1000 раз в течение 6-12 ч

  • С-реактивный белок (СРБ) 

  • Концентрация в сыворотке крови здорового человека (г/л) < 0.005

8.16. Методы определения холестерина в сыворотке крови

  • Холестерин выполняет важные биохимические функции в человеческом организме. ХС необходим для синтеза стероидных и половых гормонов, образования желчи. Входит в состав всех клеточных мембран организма.

  • ХС синтезируется главным образом в печени, в меньших количествах синтезируется во многих других органах. 20-30% ХС поступает в организм с пищей.

  • ХС ЛПНП определяется колориметрическими и нефелометрическими методами (оценка мутности), методом препаративного ультрацентрифугирования, путем электрофореза ЛП сыворотки.

8.17. Требования преаналитического этапа исследования липидного спектра

  • Все требования к анализу крови.

  • В процессе хранения образцов концентрация триглицеридов меняется под действием эндогенных липаз. Концентрация триглицеридов в образце падает, тогда как содержание свободного глицерина растет.

  • Степень этих изменений варьирует от человека к человеку и не связана с первоначальной концентрацией триглицеридов.

  • Кроме того, состав липидов плазмы определяет их поведение при центрифугировании. Хиломикроны и их остатки имеют тенденцию собираться в верхнем слое плазмы, тогда как другие липопротеины остаются равномерно распределенными. Это следует принимать во внимание, когда в анализаторе используются первичные пробирки.

8.18. Лабораторная диагностика порфирий

  • Порфирии - это группа наследственных заболеваний или болезней с наследственным предрасположением с увеличением содержания порфиринов или их предшественников, что обусловливает ряд различных клинических признаков при разных видах порфирии.

  • В норме основное количество порфиринов синтезируется в костном мозге и печени. В костном мозге они используются главным образом для образования гемоглобина, в печени используются для образования цитохромов, каталазы, пероксидазы и других ферментов, в состав которых входит гем. Порфирины синтезируются во всех клетках организма. Это необходимо для синтеза цитохромов, но гем синтезируется в других органах во много раз меньше, чем в костном мозге и печени. В связи с этим нарушения синтеза порфиринов возможны как в эритрокариоцитах костного мозга, так и в печени. Все порфирии делят на эритропоэтические и печеночные.

Диагностика

  • Кровь - гемолитическая анемия.

  • Повышение уровня уропорфирина и копропорфирина в моче и в эритроцитах.

  • Повышение копропорфирина и протопорфирина в кале.

  • Изучение активности ферментов.

8.19. Нозологические формы, при которых встречаются нарушения пигментного обмена

  • Пигментный обмен — совокупность процессов образования, превращения и распада пигментов в живых организмах.

  • Все пигменты, встречающиеся в организме, можно разделить по происхождению на три основные группы: хромопротеидные, альбуминогенные и липохромы.

  • Хромопротеидные пигменты - дериваты гемоглобина: гемин (солянокислая соль гематина), гемосидерин, а также порфирины и желчные пигменты. Нарушение обмена гемоглобина и образование хромопротеидных пигментов происходит в тех случаях, когда в организм не поступают пирроловые соединения и железо, являющиеся основными компонентами гемоглобина, или же в тех случаях, когда в организме нарушены усвоение и метаболизм их.

  • При токсических воздействиях гемолитических ядов, при хронических инфекционных заболеваниях, злокачественных анемиях, кровоизлияниях возникают гемосидерозы, характеризующиеся отложением железосодержащего золотисто-желтого пигмента гемосидерина, состоящего из апофорретина и железа. Отложение происходит преимущественно в клетках макрофагальной системы - в селезенке, печени и костном мозге, реже - в эпителии почечных канальцев.

  • Ярко выраженные гемосидерозы развиваются при гемохроматозах. Гемохроматозы относятся к нарушениям обмена железа и характеризуются отложением его в печени, лимфатических узлах, поджелудочной железе, слюнных и эндокринных железах. При этом в печени обычно развиваются цирротические изменения, а при циррозе поджелудочной железы - бронзовый диабет. Бронзовая окраска кожи объясняется отложением железосодержащего пигмента и липофусцина. Гемохроматоз наблюдается при кахексиях, прогрессирующих атрофических процессах, хронических отравлениях алкоголем, мышьяком, медью.Также гемохроматоз - наследственное, генетически обусловленное заболевание, проявляется нарушением обмена железа с накоплением его в тканях и органах

  • При ряде заболеваний увеличивается выделение с мочой порфиринов. Синтез разных типов порфиринов происходит из промежуточных продуктов белкового и углеводного обмена - гликокола и янтарной кислоты. Одна из первых ступеней такого синтеза - образование порфибилиногена - сопровождается выделением его в мочу, в которой он окисляется в уропорфирин, придающий моче красноватую окраску. Декарбоксилирование и дегидрирование порфиринов ведут к последовательному их превращению в копропорфирин и протопорфирин, или гематопорфирин, не содержащий железа и являющийся материалом для образования гемина.

  • Заболевания, характеризующиеся нарушением синтеза порфиринов, бывают врожденными. При них, кроме уропорфирина III, участвующего в синтезе гема, образуется также уропорфирин I. Заметно увеличивается количество выводимых порфиринов, развивается порфиринурия. 

  • Хроническая форма характеризуется нарушением эритропоэтической функции костного мозга. Порфирины откладываются в тканях (кожа, кости, зубы). На освещенных местах кожа изменяется ввиду фотосенсибилизирующих свойств порфирина и появления большой чувствительности кожи к свету. 

  • Острая порфиринурия может возникать при унаследованной патологии печени, характеризуется интоксикацией с преобладанием нервных или абдоминальных симптомов в виде рвоты, запора и метеоризма. Вторичные, приобретенные, порфиринурии возникают при свинцовом отравлении, пернициозной анемии, пеллагре, отравлениях мышьяком, ртутью, барбитуратами.

  • Желчные пигменты, преимущественно билирубин, также образуются из негемовой части гемоглобина. Нарушение билирубинообразования связано с патологие печени.

  • Большую группу пигментов представляют собой пигменты альбуминного происхождения (ангемоглобиногенные, или аутогенные, пигменты). Сюда относят меланины.

  • При болезни, развивающейся вследствие нарушения функции надпочечников - бронзовой болезни Аддисона, наблюдается выраженная пигментация кожи и слизистых вследствие отложения пигмента, который образуется из тирозина и продукта его окисления - диоксифенилаланина. Под влиянием окислительных ферментов диоксифенилаланин через стадию хинонов переходит в темно окрашенное вещество, откладывающееся при патологических условиях в тканях. Этот процесс происходит в меланоцитах.

  • Наконец, липохромы являются пигментами, сопровождающими обычно жир. В норме они откладываются в местах накопления жиров. Эти пигменты частью поступают извне с пищей (как родственные ксантофилу и каротину), частью образуются в самом организме. Они обнаруживаются в опухолях - липомах.

8.20. Нозологические формы, при которых встречаются нарушения азотистого обмена

  • Нарушения азотистого обмена можно разделить на две группы:

  • 1) общие, являющиеся следствием патологических изменений в соотношениях процессов синтеза и распада белков или значительных потерь белков;

  • 2) частные, касающиеся лишь обмена отдельных белков или аминокислот; они не отражаются заметно на общем азотистом обмене, но ведут к образованию анормальных белков или продуктов их обмена.

  • Одной из наиболее частых причин общих нарушений азотистого обмена является количественная или качественная белковая недостаточность питания (экзогенная). Будучи длительной, она вызывает резкие нарушения биосинтеза белков в различных органах, в том числе ферментных белков, что ведет к патологическим изменениям не только А. о., но и всех других видов обмена.

  • Типичным примером таких дистрофий является широко распространенное в некоторых странах Азии и Африки заболевание детей квашиоркор.

  • Значительное уменьшение синтеза белков сыворотки крови в печени и лимфоидной системе, особенно альбуминов и ү-глобулинов, ведет к гипопротеинемии и резкому снижению сопротивляемости организма инфекции.

  • Гипопротеинемия в свою очередь может быть причиной тяжелых нарушений водного обмена и отеков. При далеко зашедшей белковой недостаточности почти полностью прекращается образование и секреция ряда пищеварительных ферментов. 

  • Кроме экзогенной белковой недостаточности, вызванной дефицитом белков в пище, при многих заболеваниях возникает эндогенная белковая недостаточность, обусловленная повышением распада белков тканей и несоответствием между резким повышением потребности в белках и низким содержанием их в пище.

  • Эндогенная белковая недостаточность возникает при длительных лихорадочных состояниях, гиперфункции щитовидной железы, после тяжелых ожогов и травм, особенно костной системы, после операции, при злокачественных новообразованиях и т. д. При некоторых поражениях почек она является следствием больших потерь белков с мочой.

  • Кроме общего уменьшения содержания белков в организме в результате отрицательного азотистого баланса, при указанных заболеваниях, как правило, наблюдаются и определенные сдвиги в соотношениях отдельных белковых фракций в органах и в сыворотке крови.

  • При обширных острых или хронических воспалительных процессах независимо от их этиологии уменьшается содержание альбуминов в сыворотке крови, относительно увеличивается —α-глобулинов, особенно α2-глобулинов, и ү-глобулинов.

  • Для ряда поражений печени характерно повышение содержания в сыворотке β-глобулинов без заметного изменения α1- и α2-глобулинов.

  • При некоторых заболеваниях в сыворотке появляются белки, которые в норме либо совсем в ней не находятся, либо содержатся лишь в очень малых количествах, например С-реактивный белок — в острой фазе ревматоидных поражений, при ряде инфекционных заболеваний и инфаркте миокарда, анормальные макроглобулины — при миеломной болезни и анемии Вальденстрема.

  • При инфаркте миокарда, поражениях печени, некоторых поражениях мышц в сыворотку крови в значительных количествах могут переходить некоторые ферменты этих органов (глютамино-аспарагиновая и глютамино-аланиновая трансаминазы, лактикодегидрогеназа, альдолаза и др.), и определение активности этих ферментов в сыворотке широко используется для диагностических целей. 

  • Частные – вопрос 8.12: нарушения обмена отдельных аминокислот.

  • А также: образование патологических гемоглобинов, отличающихся от нормальных по содержанию некоторых аминокислот в молекуле глобина и в связи с этим пониженной способностью к связыванию кислорода. Образование этих патологических гемоглобинов играет основную роль в патогенезе серповидноклеточной и некоторых других видов анемий.
написать администратору сайта