Главная страница

Методичка № 10 Зоонозы. Возбудители зоонозных инфекций чумы, псевдотуберкулеза, бруцеллеза, туляремии


Скачать 154.5 Kb.
НазваниеВозбудители зоонозных инфекций чумы, псевдотуберкулеза, бруцеллеза, туляремии
АнкорМетодичка № 10 Зоонозы.doc
Дата06.04.2017
Размер154.5 Kb.
Формат файлаdoc
Имя файлаМетодичка № 10 Зоонозы.doc
ТипМетодическая разработка
#647
КатегорияБиология. Ветеринария. Сельское хозяйство

ФЕДЕРАЛЬНОЕ АГЕНТСТВО ПО ЗДРАВООХРАНЕНИЮ И СОЦИАЛЬНОМУ РАЗВИТИЮ
++ ГОУ ВПО Кировская государственная медицинская академия

МЕТОДИЧЕСКАЯ РАЗРАБОТКА ДЛЯ ПРЕПОДАВАТЕЛЕЙ
практического занятия № 10 по микробиологии для студентов

3 курса лечебного и педиатрического факультетов
ТЕМА: «Возбудители зоонозных инфекций: чумы, псевдотуберкулеза, бруцеллеза, туляремии».

ЦЕЛЬ: способствовать формированию умений по изучению микробиологии зоонозных инфекций, освоению принципов их микробиологической диагностики.
Задачи:

- рассмотреть биологические свойства возбудителей зоонозных инфекций: чумы, псевдотуберкулеза, бруцеллеза, туляремии;

- изучить эпидемиологию, патогенез, особенности клинического течения, специфическую профилактику заболевания, вызываемых этими возбудителями;

- обучить методами лабораторной диагностики чумы, псевдотуберкулеза, бруцеллеза, туляремии

Студент должен знать:

1) до изучении темы – морфологию микроорганизмов, факторы патогенности бактерий, особенности зоонозных инфекций, методы микробиологической диагностики инфекционных заболеваний, принципы их специфической профилактики и терапии;

2) после изучения темы – биологические особенности возбудителей чумы, псевдотуберкулеза, бруцеллеза. туляремии; эпидемиологию и патогенез вызываемых ими заболеваний, принципы их профилактики, лабораторную диагностику вызываемых ими заболеваний.

Студент должен уметь:

- правильно отбирать патологический материал у больных для микробиологической диагностики;

- приготовить мазок из исследуемого материала и окрасить его;

- осуществить микроскопию мазка;

- произвести посев материала на питательные среды;

- идентифицировать выделенную чистую культуру возбудителя;

- определить его чувствительность к антибиотикам.


Контрольные вопросы:

1. Изложите историю изучения возбудителей зоонозных инфекций.

2. Какова таксономия возбудителей зоонозных инфекций?

3.Какие особенности характерны для биологических свойств возбудителей чумы, псевдотуберкулеза, бруцеллеза, туляремии?
4. Укажите особенности эпидемиологии указанных зоонозных инфекций.

5. Каким образом осуществляется микробиологическая диагностика изучаемых зоонозных инфекций?

6. Каким образом проводится профилактика зоонозных заболеваний?

7. Каковы основные принципы рациональной терапии этих заболева-

ний?

МЕТОДИЧЕСКИЕ УКАЗАНИЯ

1.ПЛАН ПРАКТИЧЕСКОГО ЗАНЯТИЯ (135 мин.)

1.1. Организационные вопросы 5 мин.

1.2. Теоретическая часть 60 мин

1.3. Практическая работа 30 мин.

1.4. Изучение демонстрационного материала 10 мин.

1.5. Оформление протоколов 10 мин.

1.6. Время на перерыв 10 мин.

1.7. Задание на следующее занятие 10 мин

1.8. Проверка протоколов и подведение итогов 5 мин.

1.9. Уборка рабочего места 5 мин
2. СОДЕРЖАНИЕ ЗАНЯТИЯ

2.1.Контроль исходного уровня знаний. Способ – программирован-

ный тест-контроль.

2.2. Ориентировочные основы самостоятельной работы студентов:

- разбор таблиц по биохимическим и серологическим свойствам возбудителей;

- выполнение практической работы;

- оформление и защита протокола занятия
3. ТЕЗИСЫ ИЗУЧАЕМОГО МАТЕРИАЛА

3.1. JERSINIA PESTIS – ВОЗБУДИТЕЛЬ ЧУМЫ


Чумаострое инфекционное заболевание, которое характеризуется сильнейшей интоксикацией, специфическим поражением лимфоузлов с развитием септицемии и тенденцией к эпидемическому и пандемическому распространению.


Таксономия

Семейство: Enterobacteriaceae

Триба - Jersinia

род - Jersinia

вид - Jersinia pestis


История изучения заболевания.

С древних времен чума известна как заболевание, протекающее в виде эпидемий с большим числом смертельных исходов. Издавна отмечено, что чума развивалась вследствие контактов с больными животными. Эпидемии чумы известны с Ш века до н.э. Иногда они приобретали вид пандемий. Достоверные сведения имеются о 3 пандемиях. Первая из них описана в 527 - 565 г.г., известная как «юстинианова» чума, она свирепствовала в Египте и Восточно-Римской империи и привела к огромным потерям среди населения. Вторая пандемия, названная «черной смертью», охватила Рим, Средиземноморье и Западную Европу в 1345 –1350 г.г., она унесла жизни около 25 миллионов человек Не обошла она и Россию. По свидетельству Карамзина («История государства Российского») , в результате прошедшей эпидемии целиком вымерло население городов Глухово и Белозерск, а в Смоленске уцелело лишь 5 жителей. В Лондоне в ту эпидемию вымерло 20% населения Третья пандемия началась в 1895 г в Гонконге; за 20 лет умерли свыше 10 миллионов человек.
В самом начале 3-й эпидемии были сделаны важнейшие открытия: был выделен возбудитель чумы и была доказана роль крыс в распространении чумы. Заболевание изучил Г.Н.Минх (1878)Возбудителя обнаружили од- новременно и независимо друг от друга французские ученые Иерсен и Китазато в 1894 году.

Большой вклад в изучение эпидемиологии чумы внесли русские ученые. Так, В.И.Исаев, И.И.Мечников изучили эпидемиологию чумы, а Д.С.Самойловичем была сделана попытка получения вакцины; под его руководством работали противочумные отряды в Архангельской области.

В 40-х годах ХХ в. отмечена последняя эпидемическая вспышка чумы в Северной Америке. Тем не менее, с !957 по 1979 было зарегистрировано около 47000 случаев чумы.

Морфология возбудителя.

Чумная палочка имеет мелкие размеры (0,3-0,7х 1-2мкм), овоидную форму (коккобацилла), похожую на бочонок, окрашивается биполярно (биполярность особенно хорошо выражена при окраске метиленовым синим или по Романовскому-Гимзе). Палочки чумы – грам(-), склонны кви-полиморфизму, могут образовывать нитевидные, колбовидные, шаровид- ные формы. В мазках из патологического материала палочки располагаются цепочками. На кровяных средах при 370С образуют нежную капсулу, которая лучше выявляется при выращивании возбудителя на слегка кислых средах. Спор и жгутиков не имеют.

Культуральные свойства.

Микроорганизмы хорошо растут на простых питательных средах. Для культивирования обычно применяются среды с добавлением гемолизированной крови, генцианвиолета, сульфата натрия, (последний подавляет рост сопутствующей микрофлоры). На поверхности жидкой питательной среде через 48 часов культивирования образуется пленка со спускающимися вниз нитями и хлопьевидный осадок («сталактитовый рост»).

На плотных питательных средах при 370С вырастают серовато-слизистые колонии, гладкие или шероховатые. Вирулентные штаммы образуют обычно R-колонии и синтезируют темный пигмент. При микро- скопическом изучении молодых колоний (через 10-12 часов культиви- рования) обнаруживаются микроколонии с неровными краями, напомина- ющие битое стекло. Позднее (через 18-24 часа) они сливаются, и появляются нежные плоские образования с фестончатыми краями и темным зернистым центром («кружевные платочки»). Зрелые колонии (40-48 час) - крупные с бурым зернистым центром и неровными краями («ромашки»).

На скошенном агаре через 48 часов выращиваниявания при 370С образуется серовато-белый налет, врастающий в агар. Оптимум роста: рН=6,9 – 7,2, температура – от 28 до 300 С. Капсула лучше образуется на кровяном агаре при 370 С.
Биохимическая активность.

Возбудитель расщепляет многие сахара; глюкозу, галактозу, мальтозу и многие другие) с образованием кислоты , без газа. По отношению к глицерину различают 2 варианта возбудителей: глицерин-позитивный (континентальный) и глицерин-негативный (оке- анический). Чумная палочка не ферментирует рамнозу. Желатину не разжижает, не образует индол и сероводород, не восстанавливает нитраты в нитриты, не расщепляет мочевину, реакция Фогес-Проскауэра - отрицательная.
Антигенная структура

Чумные палочки содержат до 18 антигенов, но не все они хорошо изучены.

ОСА (основной соматический антиген), токсичен для человека и животных (белых крыс и мышей).

О-антиген - эндотоксин, похожий на эндотоксин многих других грам(-) бактерий.

F1–антиген (фракция-1) - основной компонент поверхностной структуры клетки, защищает бактерии от фагоцитоза и обусловливает иммуногенные свойства возбудителя.

VW – это фактически 2 антигена, они всегда встречаются вместе у вирулентных штаммов: V-антиген - белок, W-фракция- липопротеин, обладающий антифагоцитарным действием и способствующий внутриклеточному размножению микробов.

Т-антиген (мышиный токсин) белковоподобное вещество, располагается внутри клетки, блокирует функции митохондрий клеток печени и селезенки. При введении лабораторным животным вызывает у них шок и быструю гибель.

Возбудитель чумы выделяет бактериоцины (пестицины), обладающие иммуногенным действием.

Факторы патогенности.

Большинство из перечисленных выше антигенов являются одновременно и факторами патогенности. Имеются также токсические субстанции, выделяемые палочками чумы, которые обладают свойствами эндо- и экзотоксинов .

Ферменты патогенности: лецитиназа, гиалуронидаза, фибриноли-

зин, плазмокоагулаза.

Структурные компоненты клетки: капсула, пили-1, обеспечивающие адгезию на клетках различных органов и тканей.

Гены, детерминирующие синтез большинства факторов патогенности, локализованы в плазмидах.

Такими образом, палочка чумы продуцирует множество факторов патогенности, является одним из самых патогенных и агрессивных возбудителей среди бактерий, в связи с чем ее относят к 1 группе микроорганизмов по степени биологической опасности для человека.
Резистентность

Палочка обладает значительной устойчивостью во внешней среде. Она хорошо сохраняется в экскрементах больных и на объектах внешней среды. В гнойном содержимом бубонов выживает 20-30 дней, в трупах животных (верблюдов, грызунов) – до 60 дней; в мокроте больных - до 10 суток; на одежде и белье – несколько недель; в трупах погибших больных - неопределенно длительное время, особенно при низких температурах. В организме блох живут до 346 дней; на овощах и фруктах – 6-11 суток.

Высоко чувствительны чумные палочки к УФЛ, высушиванию, повышенной температуре. При нагревании до 600 С возбудители погибают за 1 час, при кипячении – за несколько минут. Чувствительны также к действию дезинфектантов: 3-5% растворы карболовой кислоты и лизола убивают их за 5-10 мин.

Экология и распространенность.

Возбудители чумы распространены на Земле повсеместно, они выявляются в разных странах. Различают очаги заболевания синантропные и природные. Заболеваемость более свойственна для степных и засушливых регионов

Эпидемиология.

Основной резервуар и источник инфекции – дикие грызуны (почти 300 видов), которые распространены повсеместно. Исто- чниками инфекции в природе являются сурки, суслики, песчанки, полевки; в городах очаги чумы – синантропные серые крысы, живущие в канализационных трубах; черные крысы, обитающие на морских судах. Сохранение чумной инфекции происходит, главным образом, благодаря передаче возбудителя от больных животных здоровым.

Механизм передачи инфекции чаще всего – трансмиссивный. Переносчиками являются, в основном, взрослые особи крысиных блох, пожизненно сохраняющих возбудителя. Человек заражается не столько при укусе блохи, сколько после втирания в кожу ее фекалий или срыгиваемых рвотных масс. (Бактерии, размножающиеся в кишечнике блохи, выделяют коагулазу, образующую пробку в глотке и препятствующую поступлению пищи в ее организм; попытка голодной блохи насасывания крови сопровождается срыгиванием зараженных масс в месте укуса).

Алиментарный путь заражения реализуется при приеме пищи, инфицированной возбудителем (например, мяса больных животных, не подвергавшегося достаточной тепловой обработке).

Контрактный путь заражения возможен, когда возбудитель проникает через поврежденные кожу или слизистые при разделке туш зараженных животных (зайцев, лис, сайгаков).

Воздушно-капельнйм путь заражения реализуется при легочной форме чумы, когда возбудитель в больших количествах попадает в воздух с мокротой больного, выделяемой при кашле.

Чума – трансмиссивный антропозооноз, способный вызывать как спорадические случаи заболевания, так и вспышки , эпидемии.
Патогенез и клинические особенности.

Естественная восприимчивость людей к возбудителю чумы – очень высокая. Чумная палочка очень быстро размножается в организме человека; бактерии в большом количестве вырабатывают разнообразные факторы патогенности, что способствует быстрому лимфогенному и гематогенному обсеменению органов. Патогенез чумы включает 3 стадии.

1. Внедрение возбудителя в организм происходит в месте укуса блохи. Он быстро попадает в лимфоузлы, где кратковременно задерживается. В лимфоузлах образуются чумные бубоны с развитием воспалительных, геморрагических и некротических явлений.

2. Распространение в кровоток (бактериемия) происходит довольно быстро. При этом развивается сильнейшая интоксикация с проявлениями геморрагий. Бактерии активно поглощаются фагоцитами, но фагоцитоз – незавершенный, поэтому он способствует дальнейшему распространению возбудителя.

3. Микробы распространяются до забарьерных клеточных систем. После преодоления ретикуло-гистиоцитарного барьера происходит диссеминация возбудителя по различным органам и системам. Микроциркуляторные нарушения вызывают изменения в сердечной мышце, сосудах и в надпочечниках, что обусловливает острую сердечно-сосудистую недостаточность.

Приаэрогенном пути заражения поражаются альвеолы. В них развивается воспалительный процесс. Последующая бактериемия сопровождается интенсивным токсикозом и развитием септико-геморрагических проявлений в различных органах и тканях.

Клинические проявления во многом зависят от способа заражения и от входных ворот инфекции. Инкубационный период – 3-6 суток, при токсических формах – 1-2 дня Различают кожную, бубонную, легочную, кишечную, септическую формы. Общая симптоматика: характерно острое начало болезни с потрясающим ознобом, повышением температуры, интоксикацией. Отмечаются сильнейшие головные, суставные, мышечные боли, жажда, рвота (нередко кровавая). Появляются галлюцинации, бред. У больныххарактерный вид: одутловатость лица, инъекция склер, выражение ужаса на лице («маска чумы»). Наблюдается аритмия, падение артериального давления.

Кожная форма характеризуется образованием карбункула на месте внедрения возбудителя. На его месте затем появляется черный струп, после его отторжения остается рубец.

Бубонная форма (наиболее частая) отличается увеличением и болезненностью региональных лимфоузлов, в основном, подмышечных и паховых. Сначала они плотные, затем размягчаются и сливаются в конгломераты.

Кишечная форма проявляется сильнейшими болями в подложечной области, профузной диареей с обильным выделением крови с слизи. Протекает тяжело и обычно заканчивается летально.

Первично-легочная форма имеет молниеносное течение и чрезвычайно контагиозна (с обильной мокротой больные выделяют огромные коли чества микробов). Смертность при данной форме достигает 100%.

Первично-септическая форма протекает с сильнейшей интоксикацией, проявляется многочисленными кровоизлияниями в кожу и слизистые оболочки. Возможно развитие массовых кровотечений из почек, кишечника, желудка. Заболевание быстро заканчивается смертью больного.
Иммунитет

Формирующийся постинфекционный иммунитет, в основном, гумо- ральный, напряженный, длительный (пожизненный).
Профилактика.

При неспецифической профилактике решающую роль играют мероприятия, исключающие завоз инфекции из других стран и предупреждающие возникновение заболевания на территории природных очагов. Существуют международные медико-санитарные правила по контролю за распространением инфекции. В очагах следят за составом и численностью грызунов, исследуют их экзопаразитов на инфицированность чумной палочкой. При выявлении эпизоотий проводится дератизация, дезинфекция.

Для специфической профилактики используются живая аттенуирован- ная вакцина из штамма EV, а также химическая вакцина. Вакцинация – по эпидпоказаниям, однократная, ревакцинация – через год. Длительность поствакцинального иммунитета –1 год
Особенности микробиологической диагностики.

Диагностика чумы осуществляется специализированными лаборатори-

ями. Материалом для исследования являются: отделяемое бубонов, язв, мокрота, слизъ из зева, кровь, испражнения, секционный материал. Применяются методы исследования: бактериоскопический (окраска мазков из исследуемого материала по Граму и метиленовым синим, РИФ); бактериологический (посев на МПА с генцианвиолетом и сульфитом натрия для выделения чистой культуры возбудителя и его последующей идентификации); биологический метод (он имеет большое значение, когда исследуемого материала мало и он загрязнен посторонней микрофлорой; материалом заражают морских свинок накожно или подкожно, затем выявляют антигены возбудителя в тканях погибших животных). Для серодиагностики используется РНГ, РИФ.

Экспресс -диагностика осуществляется с использованием РИФ и ИФА

3.2.JERSINIA PSEUDOTUBЕRCULОSIS - ВОЗБУДИТЕЛЬ

ПСЕВДОТУБЕРКУЛЕЗА
Псевдотуберкулез – острое инфекционное зоонозное заболевание, характеризующееся общей интоксикацией, лихорадкой, скарлатинопо- подобной сыпью, поражением желудочно-кишечного тракта и суставов
Первым иерсиний открыли в 1883 г. Маляссе и И В.Виньяль. В 1886 г. Эберт, исследуя внутренние органы морских свинок, погибших при заражении возбудителями псевдотуберкулеза, обнаружил у них узелковые образования, похожие на туберкулезные гранулемы, и ввел понятие “псевдотуберкулез”. Первые случаи псевдотуберкулеза у людей в виде абсцедирующих мезаденитов описали В.Массхофи В.Кнапп в 1953 году.

В 1954 году на Дальнем Востоке СССР наблюдалась эпидемия псевдотуберкулеза, получившего тогда название «дальневосточной скарла- тиноподобной лихорадки». Позднее (в 1965 году) В.А.Знаменский и К.В.Вишняков из фекалий больного выделили палочку псевдотуберкулеза.

иерсинии псевдотубеокулеза по биологическим свойствам очень близки возбудителям чумы (80% гомологии ДНК), но отличаются гораздо меньшей болезнетворностью.
Морфология.

Мелкие кокковидные грам(-) палочки, перитрихии с закругленными концами. Размеры – 0,8-2,0 х 0,4-0,8 мкм. Располагаются попарно или цепочками. Имеется капсула, выявляемая при электронной микроскопии.

Культуральные свойства. Факультативные анаэробы; хорошо растут на простых питательных средах, особенно с добавлением крови. Рост в жидких питательных средах – в виде помутнения, позднее появляется осадок. На твердых средах вырастают выпуклые желтовато-серые колонии маслянистой консистенции (S-форма). R- формы не отличаются от R- форм Jersinia pestis: колонии – выпуклые, бугристые, с фестончатыми краями. На среде Эндо вырастают бесцветные колонии.
Биохимическая активность.

Бактерии расщепляют до кислоты и газа многие сахара: глюкозу, рамнозу, арабинозу, галактозу и многие другие. Не ферментируют лактозу, сахарозу, дульцит, крахмал, инулин. Желатин не разжижают, восстанавливают нитриты. Образуют сероводород, обладают оксидазной и каталазной активностью. Реакция Фогес-Проскауэра - отрицательная.
Антигенные свойства.

Бактерии имеют Н- и О-антиены, а также антигены вирулентности V- и W, расположенные на наружной мембране. По О-антигену выделяют 8 серогрупп (1 – УШ). По сочетанию О- и Н- антигенов различают 13 сероваров и подсероваров. Наиболее опасны для человека серовары О1, ОШ, О1У.

Имеются также общие антигены с чумной палочкой.
Факторы патогенности.

Возбудитель выделяет экзотоксин (энтеро- токсин), играющий роль в развитии диареи. Из ферментов патогенности имеются гиалуронидаза и нейраминидаза. Вирулентность бактерий связана, прежде всего, с инвазивностью – способностью проникать в клетку, а также с антифагоцитарной активностью, обусловленной наличием капсулы.
Резистентность.

Иерсинии весьма устойчивы к замораживанию и оттаиванию, они способны длительное время выживать в почве и воде. Вместе с тем, они чувствительны к высыханию, действию солнечных лучей и высоких температур. При 600С гибель наступает через 30 минут, при кипячении – за несколько секунд. 3-5% карболовая кислота, лизол действуют в течение 5 минут. Чувствительны к стрептомицину.
Эпидемиология.

Источником и резервуаром инфекции являются инфицированные дикие и синантропные животные ( полевки, домашние крысы, зайцы)

Механизм заражения – фекально-оральный. Грызуны высоко-восприимчивы к иерсиниям, распространены практически повсеместно и всегда имеют возможность инфицировать своими выделениями продукты питания, воду и почву, где сохраняются длительное время, а при определенных условиях активно размножаются.

Ведущий путь заражения – алиментарный: оно происходит при употреблении в пищу инфицированных продуктов. Опасны сырые или недостаточно термически обработанные овощи, молочные и мясные продукты, в том числе хранившиеся в холодильнике.

Псевдотуберкулез распространен повсеместно, на всех континентах земного шара, он поражает и людей , и животных, и птиц. Причинами отмечающегося роста заболеваемости за последние годы являются: тенденция к укрупнению городов, широкая организация сети общественного питания, применение холодильной техники, создание больших складов для хранения продуктов , нарушение санитарно-гигиенических условий их хранения
Патогенез и клинические особенности.

Естественная восприимчивость организма человека к инфекции невелика. В большинстве случаев заражение возможно лишь при поступлении больших доз возбудителя.

Иерсинии псевдотуберкулеза проникают в энтероциты, далее – в слизистые и подслизистые слои подвздошной и слепой кишки, в лимфоидные образования кишечной стенки, региональные лимфоузлы, аппендикс. Здесь возбудители размножаются. Развивается гиперемия и гиперплазия лимфоузлов с формированием микроабсцессов. Зараженные клетки разрушаются, и возбудитель проникает в кровь (бактериемия). Развивающиеся воспалительные процессы могут имитировать клинику аппендицита (псевдоаппендицит). Через 5 – 7 дней наступает выздоровле- ние. Реже наблюдается генерализация процесса с поражением других внутренних органов и летальным исходом.

Клинические особенности. В разгаре заболевания у больных повышается температурадо 38-390С, отмечаются интоксикация, диспептический синдром в сочетании и с катаральнымсиндромом. Характерно также появление скарлатинозной сыпи на 2-6-й дни заболевания. Могут появиться боли в суставах. Примерно в 3-10% случаев заболевание переходит в хроническую форму.
Иммунитет

Послеперенесения инфекции формируется клеточный (в основном) и гуморальный иммунитет, но образующиеся антитела не обладают защитным действием. Характерно формирование гиперчувствительности замедленного типа.
Особенности микробиологической диагностики .

Материалом для исследования являются: кровь, испражнения, продукты питания, вода. Посев первоначально производится на среду Эндо (на среде Плоскирева возбудитель не растет). После выделения чистой культуры определяют основные биохимические свойства выделенной культуры. Окончательное типирование осуществляют в реакции агглютинации с О- и Н- диагностическими сыворотками. Антитела выявляют в РПГА.


3.3. БРУЦЕЛЛЫ – ВОЗБУДИТЕЛИ БРУЦЕЛЛЕЗА
Бруцеллез – зоонозное инфекционно-аллергическое заболевание, склонное к хронизации и протекающее с преимущественным поражением опорно-двигательного аппарата, сердечно-сосудистой, нервной и половой систем.
История открытия возбудителей.

Бруцеллез как заболевание известен давно, со времен Гиппократа , но научное его изучение началось в 60-х годах Х1Х века. В то время оно получило название «средиземноморская, или мальтийская лихорадка» В 1886 г. Д.Брюс обнаружил возбудителя заболевания в мазках из селезенки погибшего от бруцеллеза больного ( впоследствии этот возбудитель был назван В.melitensis). В 1897 году датские ученые выделили сходные микроорганизмы при инфекционных абортах у коров. В 1914 г. Д Траум обнаружил аналогичных возбудителей у больных свиней и назвали их В.suis. В 1920 г эти бактерии были объединены в один род, названный в честь Д.Брюсса бруцеллами. Позднее были выделены другие виды бруцелл: в 1957 г - В.neotomae (от кустарниковых крыс); в 1970 – В. оvis (от барана); В.canis (от гончих собак). Серологические исследования при диагностике бруцеллеза были начаты в 1897 году А.Райтом и Д.Семплом. Большой вклад в изучение заболевания внесли русские ученые А.Ф.Билибин, Г.П.Руднев, А.А.Вершилова и другие.

У животных заболевание проявляется инфекеционнымиабортами.
Таксономия

Род - Вrucella,

виды: В. abortus , В.melitensis, В.suis, В.саnis, В ovis, В.neatomae. Наиболее патогенны для человека – первые 3 вида.
Морфология.

Возбудители представляют собой мелкие кокковидные палочки размерами 0,6 -1,5 х О,5 – 0,7 мкм, грам (-), неподвижные, спор не образуют. Свежевыделенные штаммы могут образовывать нежную капсулу. Бруцеллы отличаются выраженным полимофизмом; в мазках бактерии располагаются беспорядочно.

Культуральные свойства.

Бруцеллы – строгие аэробы. Они требова- тельны к питательным средам, для их роста необходимы тиамин, ниацин, биотин. Они хорошо растут на печеночном, сывороточном или кровяном агаре (с добавлением 0,5% эритроцитов барана). Особенностью бруцелл бычьего типа является их потребность в повышенном содержании в атмосфере углекислого газа. На плотных питательных средах бруцеллы образуют выпуклые гладкие мутноватые колонии с перламутровым оттенком (S-формы). При длительном выращивании колонии приобретают желто-зеленый оттенок. Возможна диссоциация в R-формы. В жидких средах наблюдается рост в виде диффузного помутнения. Характерен медленный рост бруцелл, особенно - первых генераций: при посеве из органов появляются через 1-3 недели и более. При пересеве лабораторных культур рост наблюдается через 1-2 дня. Оптимальные условия культивирования: температура - 370С, рН среды – 6,6-7,4.

Биохимическая активность

Выражена слабо: бруцеллы ферментируют глюкозу и арабинозу до кислоты, разлагают белки с образованием сероводорода, восстанавливают нитриты, индол не образуют.

Разделение на виды основано на биохимических различиях, в частнос-

ти, на способности расти на средах с фуксином и тионином, на лизабельно-

сти специфическими фагами, а также на агглютинабельности монороцеп-

торными сыворотками. Т Таблица1

Видовые различия бруцелл

Виды

бруцелл

Рост на средах с красителями

Образование

сероводорода

Потребность

в СО2

фуксином

1:5000

тионином

1:2500

B. melitensis

(3 биовара)

+

+





B. abortus

(8. биоваров)

+



+





В .suis

(4 биовара)



+

+





Антигенная структура .

У бруцелл выявлено до 15 антигенных фракций. Различают родовой и поверхностный антигены. М-антиген доминирует у В.melitensis ; A-антиген преобладает у В. abortus и В suis; R-антиген свойственен шероховатым формам. Третий, поверхностный антиген L, термолабильный, имеет сходство с Vi-антигеном сальмонелл. Имеются общие антигены с возбудителями туляремии и с холерными вибрионами.


Факторы патогенности.

Бруцеллы обладают эндотоксином, имеющим высокую инвазивную способность. Они продуцируют также ферменты патогенности: гиалуронидазу и нейраминидазу. Адгезивные свойства связаны с пилями-1 и белками наружной мембраны. Считают, что возбудитель, обладая высокой инвазивностью, может проникать в организм человека через неповрежденые кожные и слизистые покровы. Бруцеллы могут образовывать капсулу. Кроме того, бруцеллы обладают выраженными аллергогенными свойствами.
Резистентность

Возбудители довольно устойчивы во внешней среде: при температуре 10-130 С они могут сохраняться в воде и влажной почве до 5 месяцев, в молоке – 9 месяцев, в сыре – до 1 года. Они устойчивы к низким температурам, и в замороженном мясе выживают до 5 месяцев. Хуже они переносят высокую температуру: при 700С погибают в течение 10 минут, при кипячении – мгновенно. Чувствительны к 3 % раствору хлорной извести. 1% хлорамину, 0,5% лизолу, 2% формалину, которые губят их за 5 минут

.

Эпидемиоогия.

Основной источник и резервуар инфекции - больные домашние животные: овцы, козы, свиньи, крупный рогатый скот. В редких случаях источником инфекции могут быть лошади , верблюды и некоторые другие животные, которые выделяют возбудителя с молоком, мочой, калом, околоплодной жидкостью.

У человека наиболее часто заболевание вызывается В.melitensis, которые обусловливают наиболее тяжелые формы заболевания. Реже человек заражается В.abortus от крупного рогатого скота, однако клинически выраженные инфекции при этом регистрируются редко. Наиболее опасными в смысле заражения являются периоды отелов скота, так как в околоплодной жидкости содержится большое количество возбудителей. Больной человек не опасен для окружающих.

Механизмы заражения - разнообразны; наиболее частый –фекальноно-оральный. Большую опасность представляют сырое молоко и молочные продукты, не подвергающиеся в процессе приготовления тепловой обработке (брынза, сыр). Мясо представляет меньшую опасность – только в случаях его недостаточной тепловой обработки. Контактно-бытовой путь заражения возможен при попадании возбудителя на поврежденные кожные или слизистые покровы при уходе за больными животными; при оказании им родовспомогательной помощи или при разделке туш больных животных. Воздушно-капельный путь заражения описан при вдыхании воздушно-пылевой смеси, содержащей инфицированные частицы шерсти, навоза, земли во время уборки помещения. Известны также случаи лабораторного заражения медицинских работников.

Для бруцеллеза свойственен выраженный профессиональный характер заболевания

.

Патогене и клинические особенности..

Бруцеллы проникают в организм человека через слизистые оболочки или кожные покровы, не оставляя никаких изменений в области входных ворот. Лимфогенным путем возбудители заносятся в региональные лимфоузы и накапливаются в них. Они подвергаются фагоцитозу, но способны выживать внутри фагоцитов за счет выделения низкомо- лекулярных факторов, угнетающих слияние фагосом с лизосомами . Внутри фагоцитов бруцеллы могут формировать L-формы и длительно перси- стировать в организме. Обратный переход в исходные формы обуслов- ливает рецидив болезни. Из разрушенных макрофагов возбудители попадают в кровоток и диссиминируют в печень, селезенку, почки, костный

мозг, эндокард. В пораженных органах образуются очаги некроза, окруженные инфильтратами. Возбудители могут попасть в молочные железы человека и появляться в грудном молоке. Из-за метастатических очагов размножения бруцелл в органах в клинической картине заболевания появляются признаки очаговых поражений со стороны опорно-двигательного аппарата, нервной и других систем. С выходом возбудителей в кровеносное русло связаны явления бактеремии и эндотоксинемии. При хроническом процессе формируются аутоиммунные механизмы

Клинические особенности. Инкубационный период – 1-4 недели (он может длиться до 2-3 месяцев). Болезнь начинается с озноба, подъема температуры, нарастающей интоксикации, слабости, могут развиваться явления орхита, эпидидимита, артрита. Поражения нервной системы проявляются в виде плекситов и радикулитов. У женщин может развиться оофорит, эндометрит, нарушения менструального цикла.

При острой форме заболевания на 4-6 день формируется состояние замедленной гиперчувствительности., что выявляется кожной пробой Бюрне.
Иммунитет

Постинфекционный иммунитет формируется нестойкий, гуморальный и клеточный, нестерильный. При этом образуются неполные антитела. Возможны повторные заболевания.
Профилактика

Неспецифическаяие мероприятия заключаются в соблюдении правил личной гигиены и режима обработки сельскохозяйственной продукции; в осуществлении профилактики заболеваемости среди животных.

Специфическая профилактика. В эндемичных очагах инфекции проводят вакцинацию живой вакциной, получаемой из аттенуированного штамма В. аbortus. Вакцинация – накожная, однократная. При отрицате-льной кожной пробе и отсутствии выработки антител проводится ревакцинация.
Лечение

Терапия основана на применении антибиотиков широкого спектра действия. Препараты выбора: тетрациклины, аминогликозиды (стрептоми-

цин); в тяжелых случаях – рифампицин Для лечения хронических форм заболевания применяется убитая бруцеллезная вакцина.
Микробиологическая диагностика.

При бактериологическом методе исследуемым материалом является: кровь, пунктат костнго мозга, моча. Посев производится в 2 флакона, в одном из них создается повышенная концентрация углекислого газа. При появлении видимого роста делают пересев на плотную питательную среду для выделения чистой культуры и последующей идентификации бактерий в РА с видовыми сыворотками.

С целью идентификации выделенных возбудителей используется комплекс признаков, отличающих виды друг от друга: потребность в углекислом газе при культивировании; способность расти на питательных средах с красителями (основной фуксин, тионин); образование сероводо- рода; способность синтезировать уреазу; чувствительность кбактериофагам

Серодиагностика осуществляется в РА Хеддельсона и Райта, Кумбса, РТГА.
3.4. FRANCISЕLLA TULARENSIS – ВОЗБУДИТЕЛЬ ТУЛЯРЕМИИ
Туляремия- острое природно-очаговое заболевание, характеризующееся поражением лимфоузлов, легких, кожных покровов, кишечника.
История открытия возбудителя. В 1910 году Д.Мак-Кой описал заболевание, обнаруженное у сусликов и напоминающее по своей клинической картине бубонную форму чумы. Вскоре он же и Ч.Чапин во время эпизоотии среди земляных белок выделили от больных животных возбудителя. Так как это происходило в районе озера Туляре в Калифорнии, выделенного возбудителя назвали В.tularensis (1912 г.). Позже выяснилось,что к этой инфекции восприимчивы и люди, и по предложению

американского бактериолога Френсиса, подробно изучившего свойства возбудителя этого заболевания у людей, оно была названо туляремией., а затем и возбудитель тоже был назван франциселлой.
Таксономия

Род Francisella, вид Francisella tularensi.

Морфология

Мелкие палочки размерами 0,2 х 0,7 мкм., неподвижные, обладают полиморфизмом, грам(-), спор не образуют, некоторые имеют капсулу. В мазках из культур преобладают кокковые формы. Окрашиваются слабо , интенсивнее окрашиваются по полюсам.
Культуральные свойства.

Факультативные анаэробы, требовательны к питательным средам. На обычных средах не растут. Культивируются на средах с добавлением яичного желтка (среда Мак-Коя). На них вырастают крупные нежные молочно-белые колонии. Фрэнсис предложил добавлять в питательную среду цистин, глюкозу, эритроциты. Хороший рост появляется также на средах с мозговой или печеночной тканью. В первых генерациях микробы роста не дают. Рост на питательных средах -замедленный, максимальных размеров колонии достигают на 3-5 дни культивирования. В жидких питательных средах – рост поверхностный в виде пленки. Оптимальные условия культивирования – рН 6,8 – 7; температура – 370С.
Биохимические свойства

Они слабо выражены. Бактерии ферментируют глюкозу, мальтозу и некоторые другие сахара до кислоты. Некоторые штаммы ферментируют глицерин, и это используется для их дифференци- ации. Образуют аммиак, сероводород, индола не образуют. Биохимическая активность нестандартна. С учетом ферментативной активности (по отно- шению к глицерину) и распространенности в природе выделяют 3 географические расы (подвиды) возбудителя:

а) голарктическая – не ферментирует глицерин, умеренно патогенна для домашних крыс и человека, распространенна в Европе и Азии;

б) среднеазиатская – ферментирует глицерин, умеренно патогенна для человека, встречается на территории нашей страны;

в) неарктическая – ферментирует глицерин, высоко патогенна для человека, распространена в Северной Америк.
Антигенная структураа.

Бактерии имеют: О-антиген, связанный с клеточной стенкой; Vi – антиген, которым обладают только бактерии в S-форме; с этим антигеном связана вирулентность и иммуногенность возбудителя. Возбудитель туляремии в S-форме (вирулентный) имеет 2 антигена: О-, имеющий сходство с антигеном бруцелл, и Vi- капсульный. Имеются также общие антигены с бруцеллами и иерсиниями.

Факторы патогенности .

О-антиген (эндотоксин), Vi-антиген, а также ферменты патогенности (гиалуронидаза, нейраминидаза), пили-1, белки наружной мембраны (адгези=

ны), капсула.

Резистентность.

Возбудитель хорошо сохраняется во внешней среде без снижения вирулентных свойств, особенно при низких температурах. Так в воде при +40 С он сохраняет жизнеспособность до 1 месяца; на зерне – до 6 месяцев; при 20-300С – 20 дней; в шкурах животных, погибших от туляремии, - до 1 месяца. Отмечается хорошая чувствительность возбудителя к высоким температурам и к дезинфицирующим веществам. При 600С гибель микробов наступает через 20 минут; при кипячении – за 1-2 минуты. 5% раствор формалина убивает возбудителя за 2-5 минут, 70% этиловый спирт - за несколько минут.

Эпидемиология.

Туляремия - природно-очаговая зоонозная инфекция. Резервуар и источни инфекции – многочисленные виды диких грызунов, зайцевидные, птицы, собаки, парнокопытные и другие животные (всего- 82 вида). Основная роль в поддержании инфекции в природе принадлежит грызунам (полевкам, крысам, ондатрам и другие).

Механизм заражения чаще всего – трансмиссивный: передается животным и птицам кровососущими насекомыми. Специфические переносчики – иксодовые клещи. Человек заражается от больных животных: при прямом контакте, например, при снятии шкур, сборе павших грызунов; алиментарным путем – через инфицированнуюводу или продукты; респираторным путем – при вдыхании содержащей возбудителей пыли от зерна. соломы, овощей.

Патогенез и клинические особенности.

Естественная восприимчивость людей – достаточно высока (практически 100%). Возбудители проникают в организм человека через кожу (поврежденную и даже неповрежденную), слизистые оболочки глаз или желудочно-кишечного тракта. Они прикрепляются к эпителиальным клеткам за счет белков наружной мембраны и капсулы. В области входных ворот часто развивается первичный аффект в виде последовательно сменяющих друг друга пятна, папулы, везикулы, пустулы и язвочки. Фагоциты активно поглощают возбудителей, но не переваривают, что создает условия для сущуствованияя их в лимфоузлах , где они активно размножаются. Часть бактерий погибает, что обусловливает интоксикацию. Из лимфоузлов возбудитель попадает в кровь (бактериемия), затем наступает стадия очаговых поражений с образованием гранулем и Постепенно развивается сенсибилизация организма. Могут появляться очаги поражения в селезенке, печени, легких, костном мозге. Возможно возникновение вторичные инфекции (пневмонии, менингита и др.).

Клинические особенности: инкубационный период – от 2 до 8 дней. Началозаболевания – острое: повышается температура, появляются озноб, головные боли, боли в мышцах, гиперемия лица. Дальнейшее течение инфекции зависит от входных ворот, в соответствии с чем различают формы заболевания: бубонную, легочную, желудочно-кишечную. Возможно развитие генерализованной формы.

Иммунитет

Формирующийся постинфекционный иммунитет - гуморальный и клеточный, стойкий, пожизненный. Развивается гиперчувствительность замедленного типа.
Профилактика

. Неспецифическая профилактика заключается в проведении мероприятий по обеззараживанию источников инфекции; нейтрализации путей ее передачи; по устранению условий заражения людей, включая санпросветработу, защиту от кровососущих насекомых, дезинфекцию в очаге поражения.

Специфическая профилактика – применение живой аттенуированной туляремийной вакцины по эпидпоказаниям. Вакцина применяется накожно

.

Лечение - комплексное с применением антибиотиков

Микробиологическая диагностика.

Материал для исследования: пунктат из бубонов, отделяемое конъюнктивы, мокрота, слизь из зева, кровь, испражнения, ткани погибших грызунов. Бактериологические исследования проводятся только в лабораториях, оборудованных для работы с особо опасными инфекциями.

Как правило, выделить возбудителя из патологического материала невозможно, поэтому проводится биологическая проба на животных (морских свинках), которых заражают исследуемым материалом. Затем делают посев крови и тканей животных для выделения чистой культуры и ее идентификации. Для окончательной идентификации заражают чистой культурой белых мышей.

Для экспресс-диагностики возбудитель идентифицируют в РИФ.

Серодиагностика проводится в РА с туляремийным диагностикумом. Положительным считается результат при получении титров 1:100 и более.

Для ранней диагностики применяется кожная проба с тулярином. (Проба остается положительной у лиц, переболевших туляремией).
4. Практические задания для студентов:

- произвести бактериологическое исследование остатков пищи при подозрении на пищевое отравление (4-й этап исследования).

- поставить реакции агглютинации Хеддельсона и Райта с сывороткой крови больного с подозрением на бруцеллез;

- выполнить микроскопию демонстрационного мазка из культуры возбудителя чумы.
5. Рекомендуемая литература

5.1 Основная литература:

1Л.Б.Борисов «Медицинская микробиология, вирусология, иммунология . М. ; 2002.

.

2. Л.Б.Борисов. «Руководство по микробиологии». М. ; 1984.

3. Л.Б. Борисов. «Руководство к практическим занятиям по микробиоло- гии, вирусологии, иммунологии». М . ; 1993.

5.2 Дополнительная:

1. А.И. Коротяев, С.А. Бабичев «Медицинская микробиология, иммунология, вирусология». С-Петербург, 1998.

2. О.К. Поздеев «Медицинская микробиология». М.; 2001.

3. В.И. Покровский. О.К. Поздеев «Медицинская микробиология». М.; 1998.

Методическая разработка обсуждена и утверждена на кафедральном совещании от «___»___________2007г., № протокола ________.

Зав.кафедрой микробиологии

доцент Е.П.Колеватых






написать администратору сайта